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陳彥利鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
西紅柿果肉RNA提取，降解嚴(yán)重 已有10人參與
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第一次提RNA，最近提西紅柿果肉RNA，降解很嚴(yán)重（見(jiàn)圖）。西紅柿果肉在液氮中不好研磨，所以我直接在裂解液里研磨的，大概2~3g西紅柿加3 mTRNzol試劑研磨（樣品量是不是大了？），用的是天根的TRNzol 總 RNA 提取試劑盒，電泳用1%瓊脂糖電泳，90V，電泳20min。上樣時(shí)，好幾次都是樣品都飄起來(lái)，沉不下去，是不是乙醇揮發(fā)不徹底？請(qǐng)老師們同學(xué)們幫忙分析一下。提了很多次都這樣，快崩潰了...求過(guò)來(lái)人指導(dǎo)！ 20141215_095059.jpg |
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陳彥利
鐵蟲 (小有名氣)
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- 專業(yè): 臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)
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我按著大家的建議，重新做了一遍： 1.因?yàn)槲骷t柿含水量太高（~90%+），所以我昨天做了一次，800 mg樣品，加2.5 ml TRNzol試劑研磨。 2.離心全程4℃; 3.電泳加大了LOADING BUFFER的量（2.5 ul buffe+5 ul 樣品，上樣5 ul）r，解決了樣品飄起來(lái)的問(wèn)題; 4.電泳緩沖液：實(shí)驗(yàn)室之前配好的50×TAE，稀釋到1× TAE作為電泳緩沖液。 5.電泳條件：改為120 V，10 min； 結(jié)果：1.電泳條帶還是一樣，降解嚴(yán)重； 2.Nanodrop 測(cè)得RNA濃度為~700 ng/ul， 260/280:1.60, 260/230:0.40;（之前得到的濃度一般是200 ng/ul左右） 我在考慮要不要換試劑盒，因?yàn)橛脛e的實(shí)驗(yàn)室的盒子提的效果還不錯(cuò)！ |
23樓2014-12-17 11:06:23
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陳彥利(金幣+1): 謝謝參與
陳彥利(金幣+1): 謝謝參與
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， [ 發(fā)自小木蟲客戶端 ] |
2樓2014-12-15 15:51:43
Neo2000
木蟲 (著名寫手)
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6樓2014-12-15 16:48:56
myyounger
至尊木蟲 (文壇精英)
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8樓2014-12-15 18:08:19
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