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陳彥利鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
西紅柿果肉RNA提取，降解嚴(yán)重 已有10人參與
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第一次提RNA，最近提西紅柿果肉RNA，降解很嚴(yán)重（見圖）。西紅柿果肉在液氮中不好研磨，所以我直接在裂解液里研磨的，大概2~3g西紅柿加3 mTRNzol試劑研磨（樣品量是不是大了？），用的是天根的TRNzol 總 RNA 提取試劑盒，電泳用1%瓊脂糖電泳，90V，電泳20min。上樣時(shí)，好幾次都是樣品都飄起來，沉不下去，是不是乙醇揮發(fā)不徹底？請(qǐng)老師們同學(xué)們幫忙分析一下。提了很多次都這樣，快崩潰了...求過來人指導(dǎo)！ 20141215_095059.jpg |
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chriscda
木蟲 (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
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一般性地，建議你注意這些事項(xiàng)：1. TRIzol一般需要達(dá)到樣品的10倍體積；2. 全程使用RNase-free的耗材、試劑（包括水）和新鮮的電泳緩沖液； 3. 在5-10分鐘內(nèi)完成電泳。 不過，具體到你的實(shí)驗(yàn)，我覺得不像是發(fā)生嚴(yán)重降解，或者說我沒覺得有降解�？赡苁荝NA載樣過多，染料（可能你用的EB，其他的也差不多）被小分子量的RNA吸附得差不多了，大分子量的18S和28S就會(huì)變暗。發(fā)生降解是你會(huì)觀察到各個(gè)條帶分子量都有變小，跑出彌散的結(jié)果。 |
35樓2014-12-18 17:21:03
★
陳彥利(金幣+1): 謝謝參與
陳彥利(金幣+1): 謝謝參與
|
， [ 發(fā)自小木蟲客戶端 ] |
2樓2014-12-15 15:51:43
Neo2000
木蟲 (著名寫手)
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6樓2014-12-15 16:48:56
myyounger
至尊木蟲 (文壇精英)
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8樓2014-12-15 18:08:19
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