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2013201621鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
5.8S和ITS1F這對(duì)引物做熒光定量土壤中的真菌的問(wèn)題
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有沒(méi)有蟲(chóng)友用5.8S和ITS1F這對(duì)引物做熒光定量，定量土壤中的真菌�。课易龅臅r(shí)候出現(xiàn)了奇怪的現(xiàn)象，用的染料是BIO-RAD 的iQ,儀器也是他家的CFX96，做標(biāo)曲的質(zhì)粒是從土壤樣品中拿這對(duì)引物擴(kuò)出來(lái)的條帶，回收、克隆 。第一次做的時(shí)候標(biāo)曲和樣品熔解曲線單峰，在80度。后面再做的時(shí)候，標(biāo)曲和樣品竟然都雙峰，80度和86度，還有一次樣品都沒(méi)擴(kuò)出來(lái)。也試過(guò)提高退火溫度，還是雙峰啊。求有經(jīng)驗(yàn)做過(guò)的小伙伴出來(lái)幫幫我啊。 |
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