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chdliusong木蟲 (小有名氣)
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[求助]
植物Cd 亞細胞分布以及化學結合形 態(tài)測定
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Cd 亞細胞分布以及化學結合形態(tài)測定 小弟第一次做植物Cd亞細胞分布以及化學結合形態(tài)測定，希望做過這方面實驗的大俠能給予建設性的指導，每部分各150金幣，可追加（50~100）  ，希望完整回答一個或兩個問題，不甚感激。問題1 :關于植物Cd亞細胞分布 文獻方法（差速分級離心）：先將冷凍的樣品倒入研缽中，加入預冷的提取劑（50 mM Tris-HCl，250 mM sucrose 和 1.0 mM C4H10O2S2，pH 7.5），然后迅速研磨成勻漿狀。將勻漿用 80 μm 的尼龍濾膜過濾，濾渣即為細胞壁及殘渣部分；濾液在 20000 g 下離心 45 min，底層碎片為細胞器組分（液泡除外），上層懸浮液為細胞質組分（含胞質及液泡內高分子和大分子有機物及無機離子）。各組分在 70˚C 烘干至恒重并用 HNO3-HClO4（4:1 v/v）進行消解。用火焰原子吸收分光光度計測定 Cd 含量。采用國家標準參比物質（植物 GBW-07605）進行分析質量控制。 我采用Cd脅迫濃度100μmol/L處理植物，學�；鹧嬖游辗止夤舛扔� 檢出限是0.001-0.1mg/ml。 Q:取鮮樣量（葉部，根部）多少合適（植株偏�。�？預冷試劑濃度是否需要微調，C4H10O2S2母液配制多大合適，易溶否？離心力，離心時間是否需要微調，離心后轉移問題，是否必須全程4℃操作？70˚C烘干 烘箱抑或其它？濕法消解注意事項（沒電加熱板，普通電爐可否；HF，過氧化氫用量，消解時間參考，顏色問題，消解完全判斷及其它）？其它注意事項及大俠心得？ 問題2：植物Cd化學結合形態(tài)測定 文獻方法（連續(xù)浸提法）：I)將樣品切碎成細片，II）將樣品浸沒在 37.5 ml 的提取劑中，并在 30˚C 下保溫 18h ， iii）回收提取液，再在離心管中加入 37.5 ml 的相同提取劑，浸提 2 h 后再次回收提取液 ，iv)使用相應的提取劑重復步驟 ii 和iii ，v）將收集的提取液（150 ml）于消解罐中蒸發(fā)近干后，用 HNO3-HClO4（4:1 v/v）進行消解，火焰原子吸收分光光度計測定 Cd 含量(提取劑分別為80% 乙醇 ；去離子水；1mol/L NaCl ；2% 醋酸，剩余殘渣) Q:鮮樣（葉部，根部）用量多少較為合適（植株偏小）？不同提取劑濃度是否已為最佳，提取劑用量是否如上？保溫溫度，時間是否需要微調，是否同時需要振蕩？消解罐如用高腳燒杯代替，需注意什么？ 其它注意事項及大俠心得？ 新的一年，同時祝蟲友們心想事成！ |
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2樓2016-11-01 22:54:50
3樓2018-04-24 21:20:27
fmm敏
新蟲 (初入文壇)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 212.9
- 帖子: 37
- 在線: 7.8小時
- 蟲號: 25878617
- 注冊: 2021-03-17
- 性別: MM
- 專業(yè): 微生物資源與分類學
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大家好，我最近也在做亞細胞實驗，請問使用文獻中的離心速度后得到的物質怎么證明是細胞壁細胞器與可溶性組分?為什么第一次離心后上清液與沉淀難以完全分離?請求各位幫幫忙。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2023-03-26 17:09:42
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