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chdliusong木蟲 (小有名氣)
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植物Cd 亞細(xì)胞分布以及化學(xué)結(jié)合形 態(tài)測定
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Cd 亞細(xì)胞分布以及化學(xué)結(jié)合形態(tài)測定 小弟第一次做植物Cd亞細(xì)胞分布以及化學(xué)結(jié)合形態(tài)測定,希望做過這方面實驗的大俠能給予建設(shè)性的指導(dǎo),每部分各150金幣,可追加(50~100) ,希望完整回答一個或兩個問題,不甚感激。問題1 :關(guān)于植物Cd亞細(xì)胞分布 文獻(xiàn)方法(差速分級離心):先將冷凍的樣品倒入研缽中,加入預(yù)冷的提取劑(50 mM Tris-HCl,250 mM sucrose 和 1.0 mM C4H10O2S2,pH 7.5),然后迅速研磨成勻漿狀。將勻漿用 80 μm 的尼龍濾膜過濾,濾渣即為細(xì)胞壁及殘渣部分;濾液在 20000 g 下離心 45 min,底層碎片為細(xì)胞器組分(液泡除外),上層懸浮液為細(xì)胞質(zhì)組分(含胞質(zhì)及液泡內(nèi)高分子和大分子有機物及無機離子)。各組分在 70˚C 烘干至恒重并用 HNO3-HClO4(4:1 v/v)進(jìn)行消解。用火焰原子吸收分光光度計測定 Cd 含量。采用國家標(biāo)準(zhǔn)參比物質(zhì)(植物 GBW-07605)進(jìn)行分析質(zhì)量控制。 我采用Cd脅迫濃度100μmol/L處理植物,學(xué);鹧嬖游辗止夤舛扔 檢出限是0.001-0.1mg/ml。 Q:取鮮樣量(葉部,根部)多少合適(植株偏。款A(yù)冷試劑濃度是否需要微調(diào),C4H10O2S2母液配制多大合適,易溶否?離心力,離心時間是否需要微調(diào),離心后轉(zhuǎn)移問題,是否必須全程4℃操作?70˚C烘干 烘箱抑或其它?濕法消解注意事項(沒電加熱板,普通電爐可否;HF,過氧化氫用量,消解時間參考,顏色問題,消解完全判斷及其它)?其它注意事項及大俠心得? 問題2:植物Cd化學(xué)結(jié)合形態(tài)測定 文獻(xiàn)方法(連續(xù)浸提法):I)將樣品切碎成細(xì)片,II)將樣品浸沒在 37.5 ml 的提取劑中,并在 30˚C 下保溫 18h , iii)回收提取液,再在離心管中加入 37.5 ml 的相同提取劑,浸提 2 h 后再次回收提取液 ,iv)使用相應(yīng)的提取劑重復(fù)步驟 ii 和iii ,v)將收集的提取液(150 ml)于消解罐中蒸發(fā)近干后,用 HNO3-HClO4(4:1 v/v)進(jìn)行消解,火焰原子吸收分光光度計測定 Cd 含量(提取劑分別為80% 乙醇 ;去離子水;1mol/L NaCl ;2% 醋酸,剩余殘渣) Q:鮮樣(葉部,根部)用量多少較為合適(植株偏。?不同提取劑濃度是否已為最佳,提取劑用量是否如上?保溫溫度,時間是否需要微調(diào),是否同時需要振蕩?消解罐如用高腳燒杯代替,需注意什么? 其它注意事項及大俠心得? 新的一年,同時祝蟲友們心想事成! |

新蟲 (初入文壇)
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大家好,我最近也在做亞細(xì)胞實驗,請問使用文獻(xiàn)中的離心速度后得到的物質(zhì)怎么證明是細(xì)胞壁細(xì)胞器與可溶性組分?為什么第一次離心后上清液與沉淀難以完全分離?請求各位幫幫忙。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
新蟲 (初入文壇)
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