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xcbjl1234銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
不同PH值流動相的配制 已有1人參與
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各位，在此想請問一個關(guān)于不同PH值的磷酸鹽緩沖液的配制問題，以前做液質(zhì)較多，通常都采用不同濃度的有機酸，現(xiàn)在做藥物分析，發(fā)現(xiàn)很多液相的分析方法都是采用磷酸鹽的緩沖液做流動相，并且好多還是等度分析的，經(jīng)驗豐富的同行希望賜教幾個問題： 1.為什么液相分離常采用磷酸鹽緩沖液？采用不同濃度的甲酸或TFA可以嗎？是不是這樣每次配制的PH會不準確，導(dǎo)致RT或分離度有變化，如果我能確保每次都一致，能否使用？ 2. 有時是等度分離？但我的有關(guān)物質(zhì)較多，等度不能分開，必須要采用梯度，這樣基線就會不平，看著不好看，并且雜質(zhì)積分不準確，有解決的辦法嗎？ 3. 最搞不明白的就是，配制不同PH值的磷酸鹽緩沖液怎么配制？比如我想配制PH為2.0、2.5、3.0的流動相，我根據(jù)藥典的緩沖液配制方式配制后使用，感覺離子濃度較大，有機相泵老出問題，一會沒壓力，一會壓力高，一會壓力又不穩(wěn)，很奇怪，A泵用的磷酸鹽，可B泵老出問題，搞不懂。然后看別的文章好多都是用多少mmol的磷酸鹽，然后用磷酸調(diào)PH值至所需要的，現(xiàn)在問題就是，這個磷酸鹽通常用什么呢？有磷酸二氫鈉，磷酸二氫鉀、磷酸二氫銨？用哪種有什么差異嗎？可能還有我不知道的別的鹽。 4. 那么配制這個緩沖鹽到底是用藥典的緩沖液配制方式還是隨意配制鹽的濃度，然后用磷酸調(diào)呢？ 希望在此行業(yè)熟悉的朋友能賜教，謝謝！ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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xcbjl1234: 金幣+20, ★★★很有幫助 2015-01-04 15:35:57
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1. 單獨添加甲酸或者TFA沒有緩沖效果。 2. 肯定要用梯度，等度分不開根本無法得到令人信服的結(jié)果�；�不平是正常情況，不會影響積分。 3. 因為A和B在混合的時候磷酸鹽會析出，不要配的濃度太高。用哪種鹽都行，pH高了調(diào)低低了調(diào)高，最后達到所需要的pH就行了。 4. 怎么配都行，但是每次都得保持一致。 另外，梯度洗脫的時候有機相比例不能太高，否則鹽會析出。 |
2樓2015-01-04 13:44:52
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