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xcbjl1234銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
不同PH值流動相的配制 已有1人參與
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各位，在此想請問一個(gè)關(guān)于不同PH值的磷酸鹽緩沖液的配制問題，以前做液質(zhì)較多，通常都采用不同濃度的有機(jī)酸，現(xiàn)在做藥物分析，發(fā)現(xiàn)很多液相的分析方法都是采用磷酸鹽的緩沖液做流動相，并且好多還是等度分析的，經(jīng)驗(yàn)豐富的同行希望賜教幾個(gè)問題： 1.為什么液相分離常采用磷酸鹽緩沖液？采用不同濃度的甲酸或TFA可以嗎？是不是這樣每次配制的PH會不準(zhǔn)確，導(dǎo)致RT或分離度有變化，如果我能確保每次都一致，能否使用？ 2. 有時(shí)是等度分離？但我的有關(guān)物質(zhì)較多，等度不能分開，必須要采用梯度，這樣基線就會不平，看著不好看，并且雜質(zhì)積分不準(zhǔn)確，有解決的辦法嗎？ 3. 最搞不明白的就是，配制不同PH值的磷酸鹽緩沖液怎么配制？比如我想配制PH為2.0、2.5、3.0的流動相，我根據(jù)藥典的緩沖液配制方式配制后使用，感覺離子濃度較大，有機(jī)相泵老出問題，一會沒壓力，一會壓力高，一會壓力又不穩(wěn)，很奇怪，A泵用的磷酸鹽，可B泵老出問題，搞不懂。然后看別的文章好多都是用多少mmol的磷酸鹽，然后用磷酸調(diào)PH值至所需要的，現(xiàn)在問題就是，這個(gè)磷酸鹽通常用什么呢？有磷酸二氫鈉，磷酸二氫鉀、磷酸二氫銨？用哪種有什么差異嗎？可能還有我不知道的別的鹽。 4. 那么配制這個(gè)緩沖鹽到底是用藥典的緩沖液配制方式還是隨意配制鹽的濃度，然后用磷酸調(diào)呢？ 希望在此行業(yè)熟悉的朋友能賜教，謝謝！ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
xcbjl1234: 金幣+20, ★★★很有幫助 2015-01-04 15:35:57
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1. 單獨(dú)添加甲酸或者TFA沒有緩沖效果。 2. 肯定要用梯度，等度分不開根本無法得到令人信服的結(jié)果�；�不平是正常情況，不會影響積分。 3. 因?yàn)锳和B在混合的時(shí)候磷酸鹽會析出，不要配的濃度太高。用哪種鹽都行，pH高了調(diào)低低了調(diào)高，最后達(dá)到所需要的pH就行了。 4. 怎么配都行，但是每次都得保持一致。 另外，梯度洗脫的時(shí)候有機(jī)相比例不能太高，否則鹽會析出。 |
2樓2015-01-04 13:44:52
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