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小李?lèi)?ài)學(xué)習(xí)銀蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
求助等點(diǎn)聚焦測(cè)等電點(diǎn)，和毛細(xì)管電泳測(cè)等電點(diǎn)。
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1、 儀器及緩沖液：我在軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院用等電聚焦的方法，測(cè)定蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)時(shí)用的是Bio-Rad的等電聚焦電泳儀。膠和上樣緩沖液也只Bio-Rad的產(chǎn)品（預(yù)制膠適合分子量為10-100kDa，等電點(diǎn)在3-10之間的蛋白；上樣緩沖液中含有0.48g/ml的尿素）。 2、 蛋白情況：我的蛋白是從芒果中純化的酸性蔗糖轉(zhuǎn)化酶，其他不同植物的這種酶等電點(diǎn)大概在5左右。我做SDS-PAGE蛋白的分子量大概在50 kDa左右，Ntive-PAGE蛋白的位置在145kda(只是大概，非變性電泳不能準(zhǔn)確測(cè)定分子量)。 3、 實(shí)驗(yàn)情況：實(shí)驗(yàn)進(jìn)行的很正常，電泳過(guò)程中電壓都正常，但是就是跑不出條帶，一開(kāi)始覺(jué)得是蛋白的濃度低，后來(lái)又增大了上樣量和蛋白的濃度也都做不出來(lái)(上樣量最多的時(shí)候蛋白的量達(dá)到了SDS-PAGE的50倍以上 )。目前懷疑是較高的尿素引起了蛋白的聚集，導(dǎo)致蛋白沒(méi)有進(jìn)入膠里面；也可能是膠的濃度太高蛋白進(jìn)不去。那邊老師說(shuō)他們做了很多都沒(méi)有問(wèn)題，唯獨(dú)我這一個(gè)。 各位大神幫我分析下原因，有知道北京哪里可以作毛細(xì)管電泳嗎？我想用毛細(xì)管電泳測(cè)等電點(diǎn)。謝謝 正常SDS-PAGE.jpg |
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小李?lèi)?ài)學(xué)習(xí)
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5樓2015-06-12 09:08:25
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