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[求助]
蛋白質(zhì)等電點(diǎn)沉淀之后怎么重新溶解
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現(xiàn)在在做蛋白質(zhì)純化，想過(guò)陽(yáng)離子交換柱，因?yàn)榈鞍踪|(zhì)穩(wěn)定pH要>4.5，等電點(diǎn)預(yù)測(cè)在5.1左右，故選用pH4.6的乙酸-乙酸鈉緩沖液，但加了之后就渾濁了，大俠們，我該怎么辦 |
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wolfman840
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【答案】應(yīng)助回帖
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| 是否精確測(cè)算過(guò)蛋白等電點(diǎn)？因?yàn)槟愕牡鞍追�(wěn)定要＞4.5，用4.6的緩沖液去置換，蛋白會(huì)先經(jīng)過(guò)5.1的等電點(diǎn)沉淀，然后繼續(xù)加會(huì)稍許變清，但是因?yàn)榫嚯x等電點(diǎn)較近，所以不會(huì)變的很清，就是說(shuō)不一定會(huì)完全溶解。樓主需要考慮一下精確測(cè)量蛋白的等電點(diǎn)，然后選擇合適的pH緩沖液。另外，層析類型也需要考慮，是否一定要用陽(yáng)離子交換？ |
2樓2013-07-02 11:03:11
不轉(zhuǎn)錄的DNA
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我想問(wèn)一下，你的蛋白是需要重新溶解，還是需要改進(jìn)實(shí)驗(yàn)方法？ 1. 如果是重新溶解，建議你變性溶解！選擇尿素或者鹽酸胍！ 2.如果是改進(jìn)實(shí)驗(yàn)方法，建議你先準(zhǔn)確計(jì)算一下你的等電點(diǎn)，然后看看等電點(diǎn)是否很高？根據(jù)等電點(diǎn)做選擇合適的離子柱！ |
3樓2013-07-02 12:26:39
marmot218
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4樓2013-07-02 13:36:40
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6樓2013-07-02 17:19:29
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8樓2013-07-02 19:53:48
marmot218
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9樓2013-07-03 09:17:31
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10樓2013-07-03 11:03:23
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