 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 3315 | 回復(fù): 22 | ||
jamy1989木蟲 (小有名氣)
|
[求助]
透析 蛋白沉淀 復(fù)性
|
|
我的目的蛋白在用8M尿素溶解后透析復(fù)性，透析完后全部沉淀了，跑膠什么都沒有！我透析的步驟是： 1、4M尿素 0.1M Tris-Hcl 0.4M L-Arg 1mM EDTA 0.2mM PMSF 5%甘油 PH=8 2、1M尿素 0.1M Tris-Hcl 0.4M L-Arg 1mM EDTA 0.2mM PMSF 5%甘油 PH=8 3、binding buffer 20mM磷酸鈉 500mM氯化鈉 5mM咪唑 PH=7.6 蟲友分析可能是透析蛋白濃度大，梯度變化太大了！于是我重新做了兩個(gè)對(duì)比試驗(yàn)。這次透析的蛋白溶度被我降低了！并且每升只透析20ml，我做了個(gè)對(duì)比試驗(yàn)： 1號(hào)瓶分別用4M 尿素、 1M尿素、binding buffer 透析！ 2號(hào)瓶分別用4M 尿素、 2M尿素、1M尿素、0M尿素、binding buffer 透析！ 結(jié)果1號(hào)瓶還是在用binding buffer透析是全部出現(xiàn)沉淀，取沉淀跑膠，能看到目的條帶！ 2號(hào)瓶也是在用binding buffer 透析是全部出現(xiàn)沉淀（大約在透析3個(gè)小時(shí)的時(shí)候就有很多沉淀了），和1號(hào)瓶一樣！另外當(dāng)2號(hào)瓶透析到0M結(jié)束時(shí)我取了一些樣保留下來，跑膠能看到目的條帶！ 我在想是不是binding buffer 有問題呢？我底下準(zhǔn)備用His-tag純化蛋白，是不是一定要用binding buffer 透析呢？ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
材料專業(yè)求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
材料專碩英一數(shù)二306
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
一志愿河北工業(yè)大學(xué)0817化工278分求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
請(qǐng)教下大家 2026年國家基金申請(qǐng)是雙盲審嗎？
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
一志愿南航材料專317分求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
環(huán)境學(xué)碩288求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
一志愿華東理工大學(xué)081700，初試分?jǐn)?shù)271
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
一志愿重慶大學(xué)085700資源與環(huán)境，總分308求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
化學(xué)308分求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
085600材料與化工調(diào)劑
已經(jīng)有11人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 原核表達(dá)形成了包涵體怎么辦��？
已經(jīng)有22人回復(fù)
- 求助：純化蛋白遇到包涵體了，尿素怎么用？
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 純酶不透析直接測(cè)酶活有影響嗎
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 鎳柱純化蛋白透析出現(xiàn)大量沉淀，請(qǐng)教
已經(jīng)有18人回復(fù)
- gst標(biāo)簽，蛋白純化
已經(jīng)有25人回復(fù)
- 【求助/交流】蛋白純化中透析的問題��！
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【分享】蛋白質(zhì)純化個(gè)人總結(jié)2
已經(jīng)有38人回復(fù)
| 頂一下！ |
2樓2012-05-06 21:56:50
danbomingyue
禁蟲 (正式寫手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
zhaohq1209: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流~ 2012-05-09 09:18:29
jamy1989: 金幣+5 2012-05-10 10:52:37
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
zhaohq1209: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流~ 2012-05-09 09:18:29
jamy1989: 金幣+5 2012-05-10 10:52:37
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
3樓2012-05-08 10:44:26
jamy1989
木蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 6557.3
- 散金: 1316
- 帖子: 155
- 在線: 91.8小時(shí)
- 蟲號(hào): 1655635
- 注冊(cè): 2012-03-01
- 專業(yè): 病原細(xì)菌與放線菌生物學(xué)
4樓2012-05-08 21:03:05
danbomingyue
禁蟲 (正式寫手)
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
5樓2012-05-09 12:14:28
dshlove
木蟲 (正式寫手)
- BioEPI: 9
- 應(yīng)助: 237 (大學(xué)生)
- 金幣: 4764.7
- 散金: 20
- 紅花: 10
- 帖子: 852
- 在線: 419.2小時(shí)
- 蟲號(hào): 1609389
- 注冊(cè): 2012-02-10
- 性別: GG
- 專業(yè): 污染控制化學(xué)
6樓2012-05-09 12:50:28
jamy1989
木蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 6557.3
- 散金: 1316
- 帖子: 155
- 在線: 91.8小時(shí)
- 蟲號(hào): 1655635
- 注冊(cè): 2012-03-01
- 專業(yè): 病原細(xì)菌與放線菌生物學(xué)
7樓2012-05-09 16:17:58
dshlove
木蟲 (正式寫手)
- BioEPI: 9
- 應(yīng)助: 237 (大學(xué)生)
- 金幣: 4764.7
- 散金: 20
- 紅花: 10
- 帖子: 852
- 在線: 419.2小時(shí)
- 蟲號(hào): 1609389
- 注冊(cè): 2012-02-10
- 性別: GG
- 專業(yè): 污染控制化學(xué)
8樓2012-05-09 18:07:44
danbomingyue
禁蟲 (正式寫手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
jamy1989: 金幣+5 2012-05-10 10:56:30
jamy1989: 金幣+5, ★有幫助 2012-05-10 10:56:38
jamy1989: 金幣+5 2012-05-10 10:56:30
jamy1989: 金幣+5, ★有幫助 2012-05-10 10:56:38
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
9樓2012-05-10 09:08:47
danbomingyue
禁蟲 (正式寫手)
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
10樓2012-05-10 09:10:10
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 jamy1989 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿河北工業(yè)大學(xué)0817化工278分求調(diào)劑 +4 | jhybd 2026-03-23 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿華東理工大學(xué)081700，初試分?jǐn)?shù)271 +3 | kotoko_ik 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿武理材料工程348求調(diào)劑 +6 | ￣^￣゜汗 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 298-一志愿中國農(nóng)業(yè)大學(xué)-求調(diào)劑 +10 | 手機(jī)用戶 2026-03-17 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 接收2026碩士調(diào)劑(學(xué)碩+專碩) +4 | allen-yin 2026-03-23 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑 +4 | LHHL66 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 323求調(diào)劑 +6 | 洼小桶 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿西安交通大學(xué)材料工程專業(yè) 282分求調(diào)劑 +11 | 楓橋ZL 2026-03-18 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +3 | 26研0 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 318求調(diào)劑 +4 | plum李子 2026-03-21 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 初試 317 +7 | 半拉月丙 2026-03-20 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求助 +5 | 夢(mèng)里的無言 2026-03-21 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +4 | www_q 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0805材料320求調(diào)劑 +3 | 深海物語 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 22 350 本科985求調(diào)劑，求老登收留 +3 | 李軼男003 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿華南師大 070300（化學(xué)）304分求調(diào)劑 +3 | 0703武芊慧雪304 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 22408 344分 求調(diào)劑 一志愿 華電計(jì)算機(jī)技術(shù) +4 | solanXXX 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +4 | 一志愿京區(qū)211 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑 +9 | 何潤采123 2026-03-18 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 材料，紡織，生物（0856、0710），化學(xué)招生啦 +3 | Eember. 2026-03-17 | 9/450 |
|