 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3329 | 回復: 22 | ||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
jamy1989木蟲 (小有名氣)
|
[求助]
透析 蛋白沉淀 復性
|
|
|
我的目的蛋白在用8M尿素溶解后透析復性，透析完后全部沉淀了，跑膠什么都沒有！我透析的步驟是： 1、4M尿素 0.1M Tris-Hcl 0.4M L-Arg 1mM EDTA 0.2mM PMSF 5%甘油 PH=8 2、1M尿素 0.1M Tris-Hcl 0.4M L-Arg 1mM EDTA 0.2mM PMSF 5%甘油 PH=8 3、binding buffer 20mM磷酸鈉 500mM氯化鈉 5mM咪唑 PH=7.6 蟲友分析可能是透析蛋白濃度大，梯度變化太大了！于是我重新做了兩個對比試驗。這次透析的蛋白溶度被我降低了！并且每升只透析20ml，我做了個對比試驗： 1號瓶分別用4M 尿素、 1M尿素、binding buffer 透析！ 2號瓶分別用4M 尿素、 2M尿素、1M尿素、0M尿素、binding buffer 透析！ 結果1號瓶還是在用binding buffer透析是全部出現(xiàn)沉淀，取沉淀跑膠，能看到目的條帶！ 2號瓶也是在用binding buffer 透析是全部出現(xiàn)沉淀（大約在透析3個小時的時候就有很多沉淀了），和1號瓶一樣！另外當2號瓶透析到0M結束時我取了一些樣保留下來，跑膠能看到目的條帶！ 我在想是不是binding buffer 有問題呢？我底下準備用His-tag純化蛋白，是不是一定要用binding buffer 透析呢？ |
回復此樓» 猜你喜歡
食品工程專碩一志愿中海洋309求調劑
已經(jīng)有8人回復
-
求調劑
已經(jīng)有7人回復
-
311（085601）求調劑
已經(jīng)有4人回復
-
305求調劑
已經(jīng)有4人回復
-
一志愿北化085600材料專碩275|有文章專利｜求調劑
已經(jīng)有7人回復
-
一志愿華理，數(shù)一英一285求A區(qū)調劑
已經(jīng)有12人回復
-
289求調劑
已經(jīng)有11人回復
-
生物學學碩，一志愿湖南大學，初試成績338
已經(jīng)有6人回復
-
321求調劑
已經(jīng)有7人回復
-
343求調劑
已經(jīng)有4人回復
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 原核表達形成了包涵體怎么辦��？
已經(jīng)有22人回復
- 求助：純化蛋白遇到包涵體了，尿素怎么用？
已經(jīng)有17人回復
- 純酶不透析直接測酶活有影響嗎
已經(jīng)有12人回復
- 鎳柱純化蛋白透析出現(xiàn)大量沉淀，請教
已經(jīng)有18人回復
- gst標簽，蛋白純化
已經(jīng)有25人回復
- 【求助/交流】蛋白純化中透析的問題�。�
已經(jīng)有9人回復
- 【分享】蛋白質純化個人總結2
已經(jīng)有38人回復
jamy1989
木蟲 (小有名氣)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 6557.3
- 散金: 1316
- 帖子: 155
- 在線: 91.8小時
- 蟲號: 1655635
- 注冊: 2012-03-01
- 專業(yè): 病原細菌與放線菌生物學
7樓2012-05-09 16:17:58
danbomingyue
禁蟲 (正式寫手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
zhaohq1209: 金幣+2, 鼓勵交流~ 2012-05-09 09:18:29
jamy1989: 金幣+5 2012-05-10 10:52:37
感謝參與，應助指數(shù) +1
zhaohq1209: 金幣+2, 鼓勵交流~ 2012-05-09 09:18:29
jamy1989: 金幣+5 2012-05-10 10:52:37
|
本帖內容被屏蔽 |
3樓2012-05-08 10:44:26
jamy1989
木蟲 (小有名氣)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 6557.3
- 散金: 1316
- 帖子: 155
- 在線: 91.8小時
- 蟲號: 1655635
- 注冊: 2012-03-01
- 專業(yè): 病原細菌與放線菌生物學
4樓2012-05-08 21:03:05
danbomingyue
禁蟲 (正式寫手)
|
本帖內容被屏蔽 |
5樓2012-05-09 12:14:28
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 305求調劑 +4 | RuiFairyrui 2026-03-28 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研]
 一志愿廈門大學化學學碩307求調劑
+10
|
y7czhao 2026-03-26 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 321求調劑 +6 | 材料cailiao 2026-03-21 | 6/300 |
|
|
[考研] 085600 286分 材料求調劑 +7 | 麻辣魷魚 2026-03-27 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 283求調劑 +7 | A child 2026-03-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料求調劑一志愿哈工大324 +7 | 閆旭東 2026-03-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研]
材料與化工考研調劑
+17
|
孅華 2026-03-22 | 17/850 |
|
|
|
[考研] 求調劑推薦 材料 304 +15 | 荷包蛋hyj 2026-03-26 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 352分 化工與材料 +5 | 海納百川Ly 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 復試調劑，一志愿南農083200食品科學與工程 +5 | XQTJZ 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 316求調劑 +5 | Pigcasso 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 考研調劑 +10 | 呼呼？~+123456 2026-03-24 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 334求調劑 +3 | 雨清天晴 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 312求調劑 +9 | 上岸吧ZJY 2026-03-22 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 考研調劑 +9 | 小蠟新筆 2026-03-26 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 321求調劑 +6 | Ymlll 2026-03-24 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿天津大學339材料與化工求調劑 +3 | 江往賣魚 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 26考研-291分-廈門大學（085601）-柔性電子學院材料工程專業(yè)求調劑 +3 | min3 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 340求調劑 +5 | 話梅糖111 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調劑一志愿海大，0703化學學碩304分，有大創(chuàng)項目，四級已過 +6 | 幸運哩哩 2026-03-22 | 10/500 |
|