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jamy1989木蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
透析 蛋白沉淀 復(fù)性
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我的目的蛋白在用8M尿素溶解后透析復(fù)性，透析完后全部沉淀了，跑膠什么都沒(méi)有！我透析的步驟是： 1、4M尿素 0.1M Tris-Hcl 0.4M L-Arg 1mM EDTA 0.2mM PMSF 5%甘油 PH=8 2、1M尿素 0.1M Tris-Hcl 0.4M L-Arg 1mM EDTA 0.2mM PMSF 5%甘油 PH=8 3、binding buffer 20mM磷酸鈉 500mM氯化鈉 5mM咪唑 PH=7.6 蟲(chóng)友分析可能是透析蛋白濃度大，梯度變化太大了！于是我重新做了兩個(gè)對(duì)比試驗(yàn)。這次透析的蛋白溶度被我降低了！并且每升只透析20ml，我做了個(gè)對(duì)比試驗(yàn)： 1號(hào)瓶分別用4M 尿素、 1M尿素、binding buffer 透析！ 2號(hào)瓶分別用4M 尿素、 2M尿素、1M尿素、0M尿素、binding buffer 透析！ 結(jié)果1號(hào)瓶還是在用binding buffer透析是全部出現(xiàn)沉淀，取沉淀跑膠，能看到目的條帶！ 2號(hào)瓶也是在用binding buffer 透析是全部出現(xiàn)沉淀（大約在透析3個(gè)小時(shí)的時(shí)候就有很多沉淀了），和1號(hào)瓶一樣！另外當(dāng)2號(hào)瓶透析到0M結(jié)束時(shí)我取了一些樣保留下來(lái)，跑膠能看到目的條帶！ 我在想是不是binding buffer 有問(wèn)題呢？我底下準(zhǔn)備用His-tag純化蛋白，是不是一定要用binding buffer 透析呢？ |
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2樓2012-05-06 21:56:50
danbomingyue
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3樓2012-05-08 10:44:26
jamy1989
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4樓2012-05-08 21:03:05
danbomingyue
禁蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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5樓2012-05-09 12:14:28
dshlove
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6樓2012-05-09 12:50:28
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7樓2012-05-09 16:17:58
dshlove
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8樓2012-05-09 18:07:44
danbomingyue
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9樓2012-05-10 09:08:47
danbomingyue
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10樓2012-05-10 09:10:10
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