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夢(mèng)回年少

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[求助] 金納米粒子吸附DNA操作順序已有2人參與

各位蟲(chóng)友：
我在做金納米粒子上以poly A為錨，吸附DNA，但對(duì)加料順序不是很確定，現(xiàn)在做的是金納米溶液和DNA混，孵育后，再加PBS（不含NaCl），再孵育一段時(shí)間，并逐步加濃的NaCl溶液至所需濃度。但從紫外上看吸收峰峰強(qiáng)會(huì)降低很多。是不是加料順序有問(wèn)題？各位都是怎么操作的呢？金納米在溶液中穩(wěn)定存在、且DNA吸附效果較好的的NaCl濃度是多少呢？DNA吸附量降低是否要相應(yīng)降低NaCl的濃度？
還有就是想問(wèn)一下大家，吸收峰位置的變化到底是由粒徑變化導(dǎo)致的，還是吸附后介電常數(shù)發(fā)生變化導(dǎo)致的，或者兩者兼而有之？
老師也沒(méi)做過(guò)這塊，希望各位做這個(gè)方向的蟲(chóng)友幫幫忙，先謝謝大家了~

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1樓 2015-01-13 21:26:31

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【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

50~60 mM NaCl 可以吸附得比較好。把DNA先加到鹽溶液里，再加納米金。

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2樓2015-01-14 21:57:11

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引用回帖:

2樓: Originally posted by 逍瀟 at 2015-01-14 21:57:11
50~60 mM NaCl 可以吸附得比較好。把DNA先加到鹽溶液里，再加納米金。

謝謝~我看文獻(xiàn)里是可以做到300mM重懸的，也有說(shuō)是先加完P(guān)BS（不含NaCl），之后逐步加鹽的，說(shuō)是屏蔽電荷，降低DNA間的靜電排斥，可以使吸附量增大。您說(shuō)50~60 mM可以吸附的很好，那吸附量是足夠大的么？DNA加到鹽溶液里是一步都加進(jìn)去？

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3樓2015-01-15 15:55:59

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【答案】應(yīng)助回帖

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夢(mèng)回年少: 金幣+5 2015-01-15 21:32:52

引用回帖:

3樓: Originally posted by 夢(mèng)回年少 at 2015-01-15 15:55:59
謝謝~我看文獻(xiàn)里是可以做到300mM重懸的，也有說(shuō)是先加完P(guān)BS（不含NaCl），之后逐步加鹽的，說(shuō)是屏蔽電荷，降低DNA間的靜電排斥，可以使吸附量增大。您說(shuō)50~60 mM可以吸附的很好，那吸附量是足夠大的么？DNA加到鹽溶 ...

其實(shí)吸附過(guò)程影響因素很多，DNA的長(zhǎng)度、納米金的大小、溶液的pH都會(huì)造成影響。據(jù)我所知，如果是用氯金酸和檸檬酸合成的納米金，粒徑大小在13nm左右，DNA的長(zhǎng)度為12-mer，pH 7.6，在這種條件下，50~60 mM NaCl基本就吸附飽和了。pH越低、鹽濃度越高，吸附越容易。DNA越長(zhǎng)吸附越慢，但吸附后解吸也越難。

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4樓2015-01-15 18:42:58

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DNA是一次性加到鹽溶液里的。

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5樓2015-01-15 18:47:03

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4樓: Originally posted by 逍瀟 at 2015-01-15 18:42:58
其實(shí)吸附過(guò)程影響因素很多，DNA的長(zhǎng)度、納米金的大小、溶液的pH都會(huì)造成影響。據(jù)我所知，如果是用氯金酸和檸檬酸合成的納米金，粒徑大小在13nm左右，DNA的長(zhǎng)度為12-mer，pH 7.6，在這種條件下，50~60 mM NaCl基本就 ...

我是準(zhǔn)備做不同poly A長(zhǎng)度的，加上spacer和probe，總共最短的也要有43-mer，這種條件下是不是考慮要增大鹽濃度以增加吸附效率，一次加的鹽濃度是不是不可以太高？

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6樓2015-01-15 21:39:36

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6樓: Originally posted by 夢(mèng)回年少 at 2015-01-15 21:39:36
我是準(zhǔn)備做不同poly A長(zhǎng)度的，加上spacer和probe，總共最短的也要有43-mer，這種條件下是不是考慮要增大鹽濃度以增加吸附效率，一次加的鹽濃度是不是不可以太高？...

可以適當(dāng)增大鹽濃度，但一般來(lái)說(shuō)，大到一定程度再增加就沒(méi)有什么意義了，你可以做個(gè)實(shí)驗(yàn)看看最大吸附時(shí)的鹽濃度大概是多少，鹽濃度太高也不好，會(huì)引起納米金的沉淀，這可能與我們是直接把納米金加到DNA鹽溶液里有關(guān)。另外可以降低溶液的pH，這個(gè)效果很好。你自己也可以把加料順序改變下看看效果，別人怎么說(shuō)都不如你自己試下好。

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7樓2015-01-16 16:05:25

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上海物理所的樊春海在JACS 上發(fā)過(guò)一篇這樣的文章，你可以參考下。但是從我們重復(fù)的效果來(lái)看，沒(méi)有他文章中說(shuō)的那么好。

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8樓2015-01-16 16:30:08

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2樓: Originally posted by 逍瀟 at 2015-01-14 21:57:11
50~60 mM NaCl 可以吸附得比較好。把DNA先加到鹽溶液里，再加納米金。

這樣做是不行的，納米金立馬就會(huì)聚集。

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9樓2015-01-16 16:31:11

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9樓: Originally posted by fujian409 at 2015-01-16 16:31:11
這樣做是不行的，納米金立馬就會(huì)聚集。...

用50 mM還好，再高了聚集明顯。我做的初期目的只是看看納米金在某個(gè)條件下DNA吸附的快慢和多少。

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10樓2015-01-16 18:43:41

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