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求助關(guān)于番茄TY3標(biāo)記（P6-25）PCR檢測(cè)所遇到的奇怪問(wèn)題！��！ 已有2人參與
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我們實(shí)驗(yàn)室用番茄TY3標(biāo)記（P6-25）對(duì)番茄育種材料進(jìn)行抗性檢測(cè)，一直出現(xiàn)問(wèn)題，現(xiàn)將問(wèn)題描述如下： 我們進(jìn)行番茄樣品的大量檢測(cè)，剛開(kāi)始的時(shí)候這對(duì)引物的效果還不錯(cuò)，但之后絕大多數(shù)DNA樣品均出現(xiàn)整個(gè)泳道彌散的狀況（明天我再上圖，現(xiàn)在手頭沒(méi)有），這里提取DNA用的都是試劑盒，我們懷疑過(guò)DNA質(zhì)量的問(wèn)題，就用CTAB以及天根的試劑盒，包括引物換過(guò)生工和英俊的，都沒(méi)有任何改善。 在此之后，我們帶著我們的引物、DNA去外地農(nóng)科院找原因，描述一下我做的主要實(shí)驗(yàn)，也是很困惑的地方： 1 首先，我們的樣品在農(nóng)科院提的DNA分別用我們的引物和農(nóng)科院的引物進(jìn)行PCR，結(jié)果我們的引物仍然出現(xiàn)泳道彌散的狀況，而他們的引物P出很清晰的條帶。 2 至此，我覺(jué)得問(wèn)題找到了，就帶著農(nóng)科院的引物、混合酶、DNA回到我們實(shí)驗(yàn)室，做重復(fù)，結(jié)果仍然泳道彌散。 3 我們也懷疑過(guò)我們實(shí)驗(yàn)室的PCR儀、水和TAE電泳系統(tǒng)的問(wèn)題，用哇哈哈純凈水進(jìn)過(guò)高溫滅菌更換了水和整個(gè)TAE電泳液，結(jié)果仍然重復(fù)不出來(lái)。 4 我們帶著做PCR的所有東西到當(dāng)?shù)匾凰髮W(xué)，用他們的PCR儀和電泳系統(tǒng)，依舊重復(fù)不出來(lái)，帶著一部分PCR產(chǎn)物回我們實(shí)驗(yàn)室跑電泳，結(jié)果依舊。 描述不清的地方請(qǐng)?jiān)賳?wèn)我，非常感謝！ 我們似乎排除了所有的因素，已經(jīng)找不到頭緒了，還望高手不吝賜教！感激不盡！ |
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2樓2015-01-17 18:28:18
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【答案】應(yīng)助回帖
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昺昺: 金幣+5, ★有幫助 2015-01-17 22:01:40
| 另外，PCR儀放樣品的板子和下端的加熱板有沒(méi)有錯(cuò)位？實(shí)驗(yàn)室以前有個(gè)人無(wú)意中把板子和加熱板錯(cuò)開(kāi)了一點(diǎn)點(diǎn)但未發(fā)覺(jué)，結(jié)果后面的人每次做PCR，EP管都插錯(cuò)位了，放在了散熱孔上，不是加熱孔上，PCR結(jié)果也是彌散一片，當(dāng)時(shí)到處找原因，最后才發(fā)現(xiàn)是PCR儀加熱板上的塑料板錯(cuò)位了，簡(jiǎn)直氣的人都快瘋了，哈哈 |
3樓2015-01-17 18:35:33
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4樓2015-01-17 18:35:42
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