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不同激發(fā)波長(zhǎng)測(cè)得熒光強(qiáng)度變化怎么是相反的結(jié)果的？ 已有1人參與
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激發(fā)波長(zhǎng)280，測(cè)得的蛋白溶液中隨加入小分子量增加，熒光強(qiáng)度逐漸降低。在295nm激發(fā)波長(zhǎng)測(cè)量，測(cè)得的隨加入小分子量增加，熒光強(qiáng)度逐漸增加。為什么會(huì)得到完全不同的兩種趨勢(shì)。加入的物質(zhì)是白藜蘆醇，加入量分別是1.25-20ug/ml，蛋白固定濃度是0.5mg/ml，本打算做蛋白被白藜蘆醇熒光淬滅，重復(fù)了三次得到的也是這么個(gè)結(jié)果，280nm處隨白藜蘆醇濃度增加，蛋白熒光減少，295nm激發(fā)的，則熒光強(qiáng)度隨白藜蘆醇增加而增強(qiáng)。并且我也用BSA重復(fù)了做發(fā)現(xiàn)BSA在280、295nm處激發(fā)都是隨白藜蘆醇濃度增加熒光減弱。求大家給點(diǎn)意見 280nm激發(fā).PNG 295激發(fā).PNG |
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wlhong2010
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
alql: 金幣+20 2015-01-19 09:38:23
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
alql: 金幣+20 2015-01-19 09:38:23
| 280nm處的激發(fā)出來的熒光主要為色氨酸和酪氨酸，且主要為色氨酸的，而295nm激發(fā)的峰主要為苯丙氨酸的。我覺得出現(xiàn)你那種情況可以理解吧，因?yàn)椴皇撬行》肿訉?duì)蛋白質(zhì)的峰都有猝滅作用，熒光增強(qiáng)現(xiàn)象也有。考慮小分子與蛋白質(zhì)作用，會(huì)改變蛋白質(zhì)構(gòu)象，氨基酸殘基的微環(huán)境肯定也會(huì)發(fā)生一定的變化，但不一定要一致吧？！因?yàn)闃?gòu)象的改變可能導(dǎo)致某些氨基酸殘基的暴露，有的被掩蓋，所以出現(xiàn)的結(jié)果也會(huì)不一樣。綜上所述，你做出來的這種情況應(yīng)該不矛盾。（個(gè)人意見哈�。� |
2樓2015-01-18 14:39:13
3樓2015-01-19 09:38:02
wlhong2010
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 好吧，我記錯(cuò)了，295nm處是色氨酸的。先謝謝你的金幣哈！你的小分子在295nm處有吸收的話，只能會(huì)導(dǎo)致你的熒光量子產(chǎn)率降低啊，而不是增強(qiáng)，所以才要扣內(nèi)源吸收。我建議你做一個(gè)同步熒光吧，得他60nm（激發(fā)和發(fā)射的間距）出來的熒光光譜完全是色氨酸的，進(jìn)一步確認(rèn)下。個(gè)人愚見哈！還有就是你的蛋白濃度可以適當(dāng)高一點(diǎn)，激發(fā)出來的峰強(qiáng)一些，結(jié)果會(huì)更明顯點(diǎn)吧，另外就是溶液要穩(wěn)定，以及反應(yīng)時(shí)間也要一致。祝好！ |
4樓2015-01-19 10:29:03
5樓2015-01-20 09:25:27
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