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克拉克肯特至尊木蟲 (著名寫手)
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Tryptic soy agar plates are made containing a diluted overnight culture of a reporter strain, the appropriate antibiotic to maintain the reporter, and X-GAL (5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-d-galactopyranoside) as a reagent to detect β-galactosidase activity.Following incubation, the plates containing hla::lacZ will become intensely blue due to high hla expression and thus production of β-galactosidase enzyme, while plates with spa::lacZ will become very light blue. spa基因和hla基因和藍白篩選有什么關(guān)系呢 fmicb-05-00706-g003.jpg |
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克拉克肯特: 金幣+15, 翻譯EPI+1, ★★★★★最佳答案 2015-01-19 09:03:45
克拉克肯特: 金幣+15, 翻譯EPI+1, ★★★★★最佳答案 2015-01-19 09:03:45
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這是一個檢測系統(tǒng)，用于篩選某些QSI抑制物。其實這兩句話本身是很容易的，我估計你對這個系統(tǒng)不了解，所以可能不知道作者在說什么。所以我就不翻譯了，只要是用我自己的話給你解釋一下這個系統(tǒng)就可以了。 背景：hla和spa都是細菌（這里是金葡菌）的表達產(chǎn)物，而且在細菌的不同生長介導表達水平是不同的：spa在細菌繁殖時高表達，而hla則在細菌靜息是高表達，人們也在試圖利用這個特定去尋找抗菌的辦法。 篩選系統(tǒng)：目的是尋找對hla和spa的表達具有調(diào)節(jié)作用的物質(zhì)某些物質(zhì)（這里是小分子物質(zhì)）。要實現(xiàn)這一目的，必需有一個方便、便于檢測的系統(tǒng)。因為雖然可以直接檢測細菌內(nèi)源性hla和spa的表達水平，但無法用于大規(guī)模（如高通量）篩選。為了解決這一問題，所以就建立了這一檢測系統(tǒng)。在該系統(tǒng)中，首先是構(gòu)建可以表達融合蛋白的表達載體，這里就是文中提及的hla::lacZ和spa::lacZ。其中前者（hla::lacZ）表達產(chǎn)物是α-毒素與β-gal的融合蛋白，后者則為蛋白A與β-gal的融合蛋白。如果對這一技術(shù)不了解，那我在用更通俗的話說一下：就是將這兩個載體導入細菌后，就可以表達出上述兩種融合蛋白。為什么要融合蛋白？便于檢測！就是說，只要在培養(yǎng)細菌時向培養(yǎng)基內(nèi)加入X-GAL，那么X-GAL就可以與含有β-gal的融合蛋白反應，產(chǎn)物引起培養(yǎng)基顏色的變化，而且顏色變化的程度反映了融合蛋白表達水平的高低。在本例中，hla融合基因的表達水平很高，所以藍顏色非常深，而spa融合基因表達水平相對較低，故而呈淺藍色。 在具體篩選時，如果加入的小分子物質(zhì)對hla:lacZ的表達有明顯抑制作用，則該融合基因的表達產(chǎn)物明顯減少，所以顏色由深藍明顯變淺，甚至干脆變?yōu)闊o色或白色；類似的，如果小分子物質(zhì)對spa:LacZ的表達具有明顯促進作用，則顏色也由淺明顯變深。話劇話說，通過觀察培養(yǎng)基顏色的變化就可以判斷所篩選的小分子物質(zhì)是否對該基因的表達有調(diào)節(jié)作用。 不知道你明白了沒有，慢慢折磨一下吧。 |
2樓2015-01-19 04:30:40
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