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克拉克肯特至尊木蟲 (著名寫手)
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Tryptic soy agar plates are made containing a diluted overnight culture of a reporter strain, the appropriate antibiotic to maintain the reporter, and X-GAL (5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-d-galactopyranoside) as a reagent to detect β-galactosidase activity.Following incubation, the plates containing hla::lacZ will become intensely blue due to high hla expression and thus production of β-galactosidase enzyme, while plates with spa::lacZ will become very light blue. spa基因和hla基因和藍白篩選有什么關系呢 fmicb-05-00706-g003.jpg |
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克拉克肯特: 金幣+15, 翻譯EPI+1, ★★★★★最佳答案 2015-01-19 09:03:45
克拉克肯特: 金幣+15, 翻譯EPI+1, ★★★★★最佳答案 2015-01-19 09:03:45
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這是一個檢測系統(tǒng)，用于篩選某些QSI抑制物。其實這兩句話本身是很容易的，我估計你對這個系統(tǒng)不了解，所以可能不知道作者在說什么。所以我就不翻譯了，只要是用我自己的話給你解釋一下這個系統(tǒng)就可以了。 背景：hla和spa都是細菌（這里是金葡菌）的表達產(chǎn)物，而且在細菌的不同生長介導表達水平是不同的：spa在細菌繁殖時高表達，而hla則在細菌靜息是高表達，人們也在試圖利用這個特定去尋找抗菌的辦法。 篩選系統(tǒng)：目的是尋找對hla和spa的表達具有調節(jié)作用的物質某些物質（這里是小分子物質）。要實現(xiàn)這一目的，必需有一個方便、便于檢測的系統(tǒng)。因為雖然可以直接檢測細菌內源性hla和spa的表達水平，但無法用于大規(guī)模（如高通量）篩選。為了解決這一問題，所以就建立了這一檢測系統(tǒng)。在該系統(tǒng)中，首先是構建可以表達融合蛋白的表達載體，這里就是文中提及的hla::lacZ和spa::lacZ。其中前者（hla::lacZ）表達產(chǎn)物是α-毒素與β-gal的融合蛋白，后者則為蛋白A與β-gal的融合蛋白。如果對這一技術不了解，那我在用更通俗的話說一下：就是將這兩個載體導入細菌后，就可以表達出上述兩種融合蛋白。為什么要融合蛋白？便于檢測！就是說，只要在培養(yǎng)細菌時向培養(yǎng)基內加入X-GAL，那么X-GAL就可以與含有β-gal的融合蛋白反應，產(chǎn)物引起培養(yǎng)基顏色的變化，而且顏色變化的程度反映了融合蛋白表達水平的高低。在本例中，hla融合基因的表達水平很高，所以藍顏色非常深，而spa融合基因表達水平相對較低，故而呈淺藍色。 在具體篩選時，如果加入的小分子物質對hla:lacZ的表達有明顯抑制作用，則該融合基因的表達產(chǎn)物明顯減少，所以顏色由深藍明顯變淺，甚至干脆變?yōu)闊o色或白色；類似的，如果小分子物質對spa:LacZ的表達具有明顯促進作用，則顏色也由淺明顯變深。話劇話說，通過觀察培養(yǎng)基顏色的變化就可以判斷所篩選的小分子物質是否對該基因的表達有調節(jié)作用。 不知道你明白了沒有，慢慢折磨一下吧。 |
2樓2015-01-19 04:30:40
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