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周思遠(yuǎn)鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
求前輩分析原因關(guān)于間接ELISA和雙抗夾心ELISA實驗的問題
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目的是用ELISA檢測某種蛋白的含量，間接法步驟 1.板在紫外照射90分鐘 2.樣品包被:將樣品中總蛋白濃度稀釋到0.055mg/ml ，0.0275mg/ML ，0.011mg/ML ，0.0055mg/ml ，0.00275mg/ML(用CBS稀釋) 4度冰箱過夜 3.在衛(wèi)生紙上拍掉昨天加的樣品 4.每孔加100微PBST 搖床放置5分鐘后拍掉清洗液 重復(fù)3次 5.每孔加2%BSA 100微 37度封閉1小時 6.在衛(wèi)生紙上拍掉2%BSA 7.每孔加100微PBST 搖床放置5分鐘后拍掉清洗液 重復(fù)3次 8.每孔加一抗 100微 （用PBS稀釋10000倍） 37度反應(yīng)1小時 9.在衛(wèi)生紙上拍掉一抗 10 .每孔加100微PBST 搖床放置5分鐘后拍掉清洗液 重復(fù)3次 11.每孔加二抗 100微 （用PBS稀釋10000倍） 37度反應(yīng)1小時 12.在衛(wèi)生紙上拍掉二抗 13 .每孔加100微PBST 搖床放置5分鐘后拍掉清洗液 重復(fù)3次 14.加pnpp ，每孔100微，37度顯色30min 15，加終止液 2M/L NaOH 已經(jīng)做過兩次了但是還是不成線性，顯色也不夠明顯 抗原為細(xì)胞中某種蛋白，樣品為細(xì)胞裂解后的全蛋白，所測濃度也是全蛋白的濃度，不知是樣品太稀了還是一抗還是二抗?jié)舛忍×耍呀夥椒?7度和零下80度反復(fù)凍融 本人本科生，以前也沒有做過這類的，希望前輩幫忙分析下原因，還有OD值大概在什么范圍內(nèi)比較合適 |
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binfeng27
銅蟲 (初入文壇)
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2樓2015-11-08 14:57:41
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