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李袁碩銅蟲 (初入文壇)
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[交流]
長片段DNA擴(kuò)增后電泳掛孔問題 已有3人參與
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| 本人在做長片段的PCR，片段長度大約18kb左右。用1%瓊脂糖120V20mins電泳，發(fā)現(xiàn)DNA全部停留在膠孔中，比較亮。之后加入等體積的水，電泳，仍有掛孔現(xiàn)象，但目的片段附近有一淺帶。將產(chǎn)物放于94度1min，16度正無窮。電泳發(fā)現(xiàn)掛孔現(xiàn)象消失（一點(diǎn)都沒有了），但是沒有主帶了，附近彌散裝。能否解釋？ |
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李袁碩
銅蟲 (初入文壇)
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8樓2015-01-23 22:49:59
★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
kx444555: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2015-01-22 16:43:52
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kx444555: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2015-01-22 16:43:52
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18k的片段跑20分鐘有點(diǎn)短了，多跑一下，放低電壓慢慢跑。出現(xiàn)樓主所說的情況沒有見過，普通瓊脂糖跑18k沒有問題�？梢詸z查一下反應(yīng)體系，模板里雜質(zhì)不要太多，最后產(chǎn)物體系太復(fù)雜，有可能造成掛孔。 將產(chǎn)物放于94度1min，這是什么意思呢？這樣是會(huì)彌散的啊，這么長的片段不好完全復(fù)性，所以會(huì)變成亂七八糟一團(tuán)麻，彌散太正常了。 |
2樓2015-01-22 09:19:18
3樓2015-01-22 09:41:00
李袁碩
銅蟲 (初入文壇)
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4樓2015-01-22 13:24:20
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