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sunday1234新蟲 (小有名氣)
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[交流]
求助，110bp左右長的雙鏈DNA用什么方法獲得，序列中有重復(fù)。 已有4人參與
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| 想獲得一段長110bp左右的雙鏈DNA，序列為5‘-CTTTGGTCTCACCAAAACGTTAAATCCGAAACAGAGTCGTTTTAGAGCTATGCTGTTTTGAATGGTCCCAAAACTTAATCTTAGAACCTTCTGTGTTTTAGAGAGAGACCTTTC-3’，在公司里合成了該雙鏈DNA，但由于連在載體上，需通過酶切回收得到，由于回收困難。所以想通過PCR擴增設(shè)計了引物正向：CTTTGGTCTCACCAAAAC反向：gaaaggtctctctctaaac，擴增后不加模板DNA，與加模板DNA都能擴出110bp左右的條帶。想請教大家還有什么辦法可以直接得到這個長110bp左右的雙鏈DNA。 |
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liuderong
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2樓2015-03-03 20:25:04
一磚頭飄死
銀蟲 (小有名氣)
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2015-03-07 23:04:51
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2015-03-07 23:04:51
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首先跟你說下我自己做實驗中遇到這樣的問題的做法，有可能不完整，可以借鑒。 我的方法是這樣的： ①首先設(shè)計一條完整的110bp的寡核苷酸單鏈，當做引物合成，這個可以讓個引物合成公司完成,Primer1 ②設(shè)計一段長約20bp的，和110bp寡核苷酸 3端完全互補的一段引物，Primer2 ③加入Primer1 and Primer2 94度 5min ，冰上急冷（退火，讓兩條鏈結(jié)合上去） ③利用 Klenow Fragment DNA聚合酶，就有5到3端的聚合作用（補平粘性末端，形成完整的平末端） ④如果加入了酶切位點可以酶切后，用愛思進的PCR純化試劑盒回收，記得加一個體積的異丙醇。 希望能幫到你……………… |
3樓2015-03-04 08:55:43
781055707
木蟲 (著名寫手)
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4樓2015-03-04 10:22:25
sunday1234
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5樓2015-03-19 14:47:31
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6樓2015-03-19 17:28:12
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