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tingy1986金蟲 (正式寫手)
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[求助]
才剛剛學(xué)養(yǎng)細(xì)胞，老板又要我細(xì)胞熒光染色，不知道操作有無誤，心里沒底，前來求助。 已有3人參與
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有前輩用過BCECF-AM熒光染色染料嗎？才剛剛學(xué)養(yǎng)細(xì)胞，又要我熒光染色，心里沒底，前來求助。 試劑終于配好了，在life買的BCECF-AM。和配套用的pHi緩沖液kit。 試劑已經(jīng)配好了，上周也實(shí)踐了一次。由于我們實(shí)驗(yàn)室其他人也沒有做過這個(gè)實(shí)驗(yàn)。所以也不能給我多好的建議。所以前來求教。哪怕是一點(diǎn)經(jīng)驗(yàn)也好。 我就想問問我的操作方面，有沒有不對的地方。 如果有不對的地方，希望指導(dǎo)指導(dǎo)我。十分感謝。 我是這樣做的 1，細(xì)胞培養(yǎng)皿的培養(yǎng)液吸掉 2，pbs洗一遍 3，pbs吸掉 4，trypsin 1ml 37度培養(yǎng)箱3分鐘 5，加入培養(yǎng)基（fbs 10%）吹打成細(xì)胞懸液 6，離心 1000rpm 3分鐘 7，吸掉培養(yǎng)基 8，加入pbs 吹打成細(xì)胞懸液 9，離心 1000rpm 3分鐘 10，吸掉pbs。 11，加入pbs 10ml 吹打成細(xì)胞懸液 12，分裝到1.5ml的 tube里。 13，離心3000rpm 3分鐘 14，吸掉pbs。 15，從1.5ml的tube里，轉(zhuǎn)移一部分細(xì)胞到96孔well。 16，37度培養(yǎng)箱20分鐘 17，放入酶標(biāo)儀分析。 由于我從來沒有接觸過培養(yǎng)細(xì)胞技術(shù)這些，網(wǎng)上也看了一些材料，感覺不太相信自己，所以請達(dá)人前輩們幫忙指點(diǎn)迷津，由于想測活細(xì)胞內(nèi)的ph值。盡可能希望細(xì)胞狀態(tài)好點(diǎn)的堅(jiān)持到酶標(biāo)儀這一步。 不知道該如何操作更好一點(diǎn)。 謝謝。 |
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