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yingmeiqi新蟲 (小有名氣)
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[求助]
請教酵母異源表達過程中Na+、K+離子的吸收動力學實驗做法
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克隆了一個基因，在酵母中用CY162和G19突變體分別驗證其介導K+、Na+吸收的功能，初步證明該基因介導K+吸收，能恢復CY162在低K+培養(yǎng)基上的生長，同時不增加G19對Na+的敏感性，且在高Na+培養(yǎng)基上，由于其介導K+吸收，因此使G19長勢更好�，F(xiàn)在想做酵母K+吸收動力學實驗，但具體過程不是特別清楚。 從文獻里看到有兩種方法： 1）用液體AP培養(yǎng)基擴大培養(yǎng)酵母轉(zhuǎn)化菌株，之后經(jīng)過無K的AP培養(yǎng)基K+饑餓處理后，添加含K的AP培養(yǎng)基，振蕩培養(yǎng)，每隔一段時間取樣，離心后，用原子分光光度子測定上清中的K+含量。這個方法比較簡單，我最初就是這么做，進行的Na+消耗實驗。先用液體AP過夜培養(yǎng)，于第二天離心后，將同時做的好幾份樣品混合，使其OD值達到1，然后向AP培養(yǎng)基中添加10mM NaCl，于0、10、30min，后每隔30min取樣，離心后取上清測定介質(zhì)中Na+含量。連續(xù)監(jiān)控了6 h，介質(zhì)中Na+含量根本不發(fā)生一絲絲變化。我想是不是提供的Na+濃度過高，培養(yǎng)的時間過短？參考的是測定K+的方法，但我測定的是Na+，看到文獻中用同樣的方法測定K+時很多也是用了6h得到的。 2）是測定酵母細胞內(nèi)的K+含量，要經(jīng)過過膜，萃取等相對繁瑣的過程。 友友們，能不能給我提供下詳細的實驗方法，以及過程中的注意事項，不勝感激！畢業(yè)季，補實驗，做不出來就無緣畢業(yè)了……跪求！ |
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涼宮春日團長
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2樓2022-09-01 23:28:48
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