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pLent-puro-CMV建穩(wěn)定高表達(dá) 已有2人參與
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pLent-puro-CMV建穩(wěn)定高表達(dá)細(xì)胞，用puro 篩選到第六天，突然細(xì)胞都死得差不多了，后來換成正常培養(yǎng)基，細(xì)胞也在死，狀態(tài)很差救不活了。做了兩次，一次質(zhì)粒是氯化銫大提，一次是去毒素大提試劑盒做的質(zhì)粒，質(zhì)粒應(yīng)該沒有問題； 構(gòu)建同時(shí)做了別的質(zhì)粒，說明轉(zhuǎn)染系統(tǒng)應(yīng)該也沒有問題。 請(qǐng)問大俠們，，咋回事呢？？？ |
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junior850621
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7樓2015-03-27 14:38:16
sc5921041
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2樓2015-03-25 04:16:15
junior850621
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
leilaye: 金幣+11, ★★★★★最佳答案 2015-03-25 21:25:05
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1，轉(zhuǎn)染也沒問題的結(jié)論是你同時(shí)瞬轉(zhuǎn)了其他質(zhì)粒嗎？有熒光標(biāo)記的還是什么讓你覺得沒問題？ 2，抽濾病毒用0.45還是0.22濾器？0.22會(huì)讓一部分病毒失活。 3，puro篩6天的做法是怎樣決定的？不知道你做的什么細(xì)胞。我感染的絕大部分細(xì)胞puro篩選不超過48小時(shí)（T47D最長96小時(shí)）。puro我用的是sigma的；也用過上海某s品牌的，真心不能用。建議同時(shí)做一個(gè)對(duì)照，沒有感染過病毒的同種細(xì)胞，類似密度，同時(shí)加同樣量的puro。當(dāng)對(duì)照接近全死的時(shí)候立刻換液。不要等所謂的6天還是多少天。 |
3樓2015-03-25 19:19:42
4樓2015-03-25 21:24:40
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