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wuwenmei新蟲 (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于真核生物表達系統(tǒng)的一些問題 已有2人參與
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| 我要表達的目的序列大概200多個bp.是一個富含二硫鍵的蛋白質(zhì)，以前有人對這個蛋白做過這個研究，是在原核生物表達系統(tǒng)中利用SUMO構(gòu)建重組蛋白，但是是包涵體，要蛋白質(zhì)復性，蛋白質(zhì)復性就面對著失活，那我應該怎么做？可以放進真核生物表達系統(tǒng)中做嗎？老板讓我找一個分泌性表達載體做，他希望不需要超聲破碎，可以分泌到培養(yǎng)基中，或者上清中，我應該怎么下手？我怎么感覺這就是一個坑，哎，誰能幫我解答下呀，最后，想問下哪一個真核生物表達系統(tǒng)適合做我的表達系統(tǒng)，我怎么選擇哪一個？有做過真核生物表達系統(tǒng)的大牛嗎？希望能解答下，謝謝， |
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kehope
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4樓2015-03-27 01:12:19
kehope
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kx444555: 金幣+3, 鼓勵交流 2015-03-28 16:24:45
kx444555: 金幣+3, 鼓勵交流 2015-03-28 16:24:45
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是個坑。我也解答不了你這個問題。 我們實驗室也是有個蛋白，原核表達不成功后老板讓我進行真核表達。但是因為實驗室窮，不可能做瞬時轉(zhuǎn)染。所以篩選穩(wěn)定株。但是穩(wěn)定株做出來后蛋白表達量很低，過柱子純化不下來。 所以我現(xiàn)在又掉頭做原核表達，我找了一些其他載體。除了sumo,nus,gst的我都進行嘗試。現(xiàn)在質(zhì)粒已經(jīng)成功，開始要小量表達純化，想到過柱子，切標簽過柱子之后蛋白還不知道有沒有活性我就犯愁啊。 我們學院新來了一個老師，做起真核表達可是刷刷的。不禁感慨隔行如隔山，有沒有人帶著差別可真大。 真核表達就是比較費錢。只要舍得花錢。 轉(zhuǎn)染試劑一轉(zhuǎn)染個五六十皿，細胞裂解液還帶走蛋白酶體抑制劑的一保護，買最貴的純化柱子一純化，就爽了。 [ 發(fā)自小木蟲客戶端 ] |
2樓2015-03-26 23:28:47
wuwenmei
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3樓2015-03-26 23:42:04
wuwenmei
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5樓2015-03-27 14:48:28
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