 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 9 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1354 | 回復(fù): 8 | |||
| 本帖產(chǎn)生 1 個 MicEPI ，點擊這里進(jìn)行查看 | |||
zdwxxw至尊木蟲 (著名寫手)
|
[求助]
新手入門，想問一下關(guān)于未知基因的表達(dá)
|
||
| 如題，如果我知道一株菌有某種功能，但是相關(guān)的基因卻沒有報道過，如何才能把這個基因找出來克隆至模式菌株中表達(dá)？ 新手入門，謝謝各位指教！ |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 基因克隆與表達(dá) |
» 猜你喜歡
0703化學(xué)336分求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
304求調(diào)劑
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
293求調(diào)劑
已經(jīng)有13人回復(fù)
-
281求調(diào)劑（0805）
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
環(huán)境領(lǐng)域全國重點實驗室招收博士1-2名
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
材料專碩306英一數(shù)二
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
301求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
一志愿天津大學(xué)化學(xué)工藝專業(yè)（081702）315分求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
302求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
26博士申請
已經(jīng)有3人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 關(guān)于基因和質(zhì)粒連接后質(zhì)粒大小問題
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 新手，想問一下
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 想詢問一下“某基因”和“某基因-like”的差別? 跪求大神詳細(xì)解答！
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 根據(jù)參考文獻(xiàn)的的引物和條件，怎么確定目的基因的大小，是什么原因
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 我想問一下如果用三條引物同時去擴(kuò)增一個目的基因。結(jié)果會怎樣？
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 某種生物特有的基因叫什么？
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 想問一下恒定表達(dá)載體，瞬時表達(dá)表達(dá)載體怎么區(qū)分？
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 為什么擴(kuò)了一個抗性基因，連到載體上，這個基因沒有表達(dá)呢，跪求各個大牛指導(dǎo)�。。�
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 如何擴(kuò)增某一功能蛋白的未知基因
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 目的基因合成在大腸桿菌里能表達(dá)么？
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 目的基因表達(dá)載體的構(gòu)建問題~請指教
已經(jīng)有6人回復(fù)
- Realtime PCR 內(nèi)參與目的基因問題
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 已知一個性狀，怎樣知道相應(yīng)的基因序列
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 請問一下關(guān)于芯片分析中差異基因的問題。。。
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 蛋白酶基因表達(dá)，用的Bacillus subtilis系統(tǒng)，但總是表達(dá)不出，求高人指點……
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 建基因文庫是為什么？弱弱的問一下，新手
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 怎么篩選植物抗性基因
已經(jīng)有10人回復(fù)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zdwxxw: 金幣+20, ★★★很有幫助, 多謝了，很有幫助，可能以后還會有什么問題，到時再打攪您，請不吝賜教！再次表示感謝！ 2012-08-28 21:31:49
rainwander: MicEPI+1, 鼓勵交流 2012-08-29 07:45:48
zdwxxw: 金幣+20, ★★★很有幫助, 多謝了，很有幫助，可能以后還會有什么問題，到時再打攪您，請不吝賜教！再次表示感謝！ 2012-08-28 21:31:49
rainwander: MicEPI+1, 鼓勵交流 2012-08-29 07:45:48
|
可以的。研究得少的東西容易出成果。我現(xiàn)在能想到的有兩種方法： 當(dāng)然，最先要做的是把這種菌株篩出來，因為一般的菌株并不會過量產(chǎn)一種酶，或者表達(dá)這種酶的高活性。如果你通過誘變甚至定向進(jìn)化的方法，可能是①解除其調(diào)控，使酶過量表達(dá)；②酶活提高，酶學(xué)性質(zhì)也提高了。如果是①的情況，該酶本身的性質(zhì)可能并沒有改變，只是調(diào)控限制被解除了，但是做克隆表達(dá)也是可以嘗試的；如果是②的情況，說明酶的基因改變導(dǎo)致內(nèi)部結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，這種酶做克隆表達(dá)是很有價值的。但我認(rèn)為，無論哪種情況，都可以做克隆表達(dá)。然后怎樣獲得該酶基因，大概我知道的有兩種： （1）我上面所說的，你可以分析一下“少數(shù)幾種菌的產(chǎn)酶基因被報道過”的這些菌株中，該酶基因的一致程度，如果基因前面幾十個堿基和最后幾十個堿基是相似的，則可以根據(jù)這些序列設(shè)計（兼并）引物，以你篩出的菌的基因組為模版進(jìn)行pcr調(diào)出基因。后面的操作是很模式化的（不同實驗室有區(qū)別），pcr得到目的基因→膠回收→加A→純化→連接T載體→轉(zhuǎn)化JM109→保藏甘油管、提質(zhì)粒、質(zhì)粒測序→轉(zhuǎn)化表達(dá)載體→發(fā)酵做酶學(xué)性質(zhì)分析。 （2）如果你不知道基因，則需要將蛋白純化出來，測定蛋白N端、C端蛋白質(zhì)序列，根據(jù)序列設(shè)計兼并引物，按（1）的步驟調(diào)取基因。 應(yīng)該還有其他方法，你可以看看分子生物學(xué)的教材，看別人用什么方法調(diào)基因。 |
4樓2012-08-28 21:25:19
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
zdwxxw: 金幣+10, ★★★很有幫助, 謝謝 2012-08-28 20:25:43
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
zdwxxw: 金幣+10, ★★★很有幫助, 謝謝 2012-08-28 20:25:43
|
通過文獻(xiàn)知道這種功能的代謝途徑，即確定是表達(dá)了哪個基因→在NCBI上查找此菌的其他亞類的此基因基因序列，通過對比序列設(shè)計引物（有可能是兼并引物）→提取此菌基因組，通過pcr獲得基因→與T載體連接，轉(zhuǎn)化入模式菌種→提出質(zhì)粒，測序→測序結(jié)果正確后，轉(zhuǎn)化入表達(dá)菌種。 這是一般流程，你要具體說明一下你的情況。 |
2樓2012-08-28 15:26:30
zdwxxw
至尊木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 77 (初中生)
- 金幣: 12836.5
- 散金: 2177
- 紅花: 27
- 帖子: 2983
- 在線: 506.3小時
- 蟲號: 1544122
- 注冊: 2011-12-20
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物遺傳育種學(xué)
3樓2012-08-28 20:31:17
5樓2012-08-28 21:30:51
6樓2012-08-28 21:34:40
jinpeng_6118
木蟲 (正式寫手)
- MicEPI: 2
- 應(yīng)助: 28 (小學(xué)生)
- 金幣: 5027
- 散金: 25
- 紅花: 2
- 帖子: 856
- 在線: 147.9小時
- 蟲號: 1019189
- 注冊: 2010-05-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物遺傳學(xué)
zdwxxw7樓2012-08-30 21:11:09
zdwxxw
至尊木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 77 (初中生)
- 金幣: 12836.5
- 散金: 2177
- 紅花: 27
- 帖子: 2983
- 在線: 506.3小時
- 蟲號: 1544122
- 注冊: 2011-12-20
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物遺傳育種學(xué)
8樓2012-08-31 14:47:52
jinpeng_6118
木蟲 (正式寫手)
- MicEPI: 2
- 應(yīng)助: 28 (小學(xué)生)
- 金幣: 5027
- 散金: 25
- 紅花: 2
- 帖子: 856
- 在線: 147.9小時
- 蟲號: 1019189
- 注冊: 2010-05-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物遺傳學(xué)
不客氣，我覺得不是真核生物的話，直接構(gòu)建DNA文庫，更方便一些 9樓2012-08-31 18:41:04
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 zdwxxw 的主題更新
| 9 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085601材料工程專碩求調(diào)劑 +5 | 慕寒mio 2026-03-16 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 材料與化工求調(diào)劑 +6 | 為學(xué)666 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料專碩326求調(diào)劑 +6 | 墨煜姒莘 2026-03-15 | 7/350 |
|
|
|
[碩博家園] 深圳大學(xué)碩士招生（2026秋，傳感器方向，僅錄取第一志愿） +4 | xujiaoszu 2026-03-11 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境工程調(diào)劑 +6 | 大可digkids 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
[考研] 318求調(diào)劑 +3 | Yanyali 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 070300化學(xué)學(xué)碩求調(diào)劑 +6 | 太想進(jìn)步了0608 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 070303一志愿西北大學(xué)學(xué)碩310找調(diào)劑 +5 | d如愿上岸 2026-03-12 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 285求調(diào)劑 +6 | ytter 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0703 物理化學(xué)調(diào)劑 +3 | 我可以上岸的對?/a> 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0856求調(diào)劑 +3 | 劉夢微 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求老師收留調(diào)劑 +4 | jiang姜66 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考博] 東華理工大學(xué)化材專業(yè)26屆碩士博士申請 +6 | zlingli 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[基金申請] 現(xiàn)在如何回避去年的某一個專家，不知道名字 +3 | zk200107 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑 +3 | 5201314Lsy！ 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +5 | 是Lupa啊 2026-03-11 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +3 | 球球古力 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 281求調(diào)劑 +9 | Koxui 2026-03-12 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 化工學(xué)碩306求調(diào)劑 +9 | 42838695 2026-03-12 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +3 | 崔wj 2026-03-12 | 4/200 |
|