 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1373 | 回復(fù): 8 | |||
| 本帖產(chǎn)生 1 個 MicEPI ，點擊這里進行查看 | |||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
[求助]
新手入門，想問一下關(guān)于未知基因的表達
|
|||
| 如題，如果我知道一株菌有某種功能，但是相關(guān)的基因卻沒有報道過，如何才能把這個基因找出來克隆至模式菌株中表達？ 新手入門，謝謝各位指教！ |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 基因克隆與表達 |
» 猜你喜歡
290求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
327求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
085600 286分 材料求調(diào)劑
已經(jīng)有11人回復(fù)
-
一志愿河北工業(yè)大學(xué)0817化工278分求調(diào)劑
已經(jīng)有15人回復(fù)
-
085601材料工程找調(diào)劑
已經(jīng)有15人回復(fù)
-
材料與化工272求調(diào)劑
已經(jīng)有15人回復(fù)
-
南京大學(xué)化學(xué)調(diào)劑
已經(jīng)有14人回復(fù)
-
一志愿北京工業(yè)大學(xué)，324分求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 關(guān)于基因和質(zhì)粒連接后質(zhì)粒大小問題
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 新手，想問一下
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 想詢問一下“某基因”和“某基因-like”的差別? 跪求大神詳細解答！
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 根據(jù)參考文獻的的引物和條件，怎么確定目的基因的大小，是什么原因
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 我想問一下如果用三條引物同時去擴增一個目的基因。結(jié)果會怎樣？
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 某種生物特有的基因叫什么？
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 想問一下恒定表達載體，瞬時表達表達載體怎么區(qū)分？
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 為什么擴了一個抗性基因，連到載體上，這個基因沒有表達呢，跪求各個大牛指導(dǎo)�。�！
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 如何擴增某一功能蛋白的未知基因
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 目的基因合成在大腸桿菌里能表達么？
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 目的基因表達載體的構(gòu)建問題~請指教
已經(jīng)有6人回復(fù)
- Realtime PCR 內(nèi)參與目的基因問題
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 已知一個性狀，怎樣知道相應(yīng)的基因序列
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 請問一下關(guān)于芯片分析中差異基因的問題。。。
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 蛋白酶基因表達，用的Bacillus subtilis系統(tǒng)，但總是表達不出，求高人指點……
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 建基因文庫是為什么？弱弱的問一下，新手
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 怎么篩選植物抗性基因
已經(jīng)有10人回復(fù)
5樓2012-08-28 21:30:51
2樓2012-08-28 15:26:30
3樓2012-08-28 20:31:17
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zdwxxw: 金幣+20, ★★★很有幫助, 多謝了，很有幫助，可能以后還會有什么問題，到時再打攪您，請不吝賜教！再次表示感謝！ 2012-08-28 21:31:49
rainwander: MicEPI+1, 鼓勵交流 2012-08-29 07:45:48
zdwxxw: 金幣+20, ★★★很有幫助, 多謝了，很有幫助，可能以后還會有什么問題，到時再打攪您，請不吝賜教！再次表示感謝！ 2012-08-28 21:31:49
rainwander: MicEPI+1, 鼓勵交流 2012-08-29 07:45:48
|
可以的。研究得少的東西容易出成果。我現(xiàn)在能想到的有兩種方法： 當然，最先要做的是把這種菌株篩出來，因為一般的菌株并不會過量產(chǎn)一種酶，或者表達這種酶的高活性。如果你通過誘變甚至定向進化的方法，可能是①解除其調(diào)控，使酶過量表達；②酶活提高，酶學(xué)性質(zhì)也提高了。如果是①的情況，該酶本身的性質(zhì)可能并沒有改變，只是調(diào)控限制被解除了，但是做克隆表達也是可以嘗試的；如果是②的情況，說明酶的基因改變導(dǎo)致內(nèi)部結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，這種酶做克隆表達是很有價值的。但我認為，無論哪種情況，都可以做克隆表達。然后怎樣獲得該酶基因，大概我知道的有兩種： （1）我上面所說的，你可以分析一下“少數(shù)幾種菌的產(chǎn)酶基因被報道過”的這些菌株中，該酶基因的一致程度，如果基因前面幾十個堿基和最后幾十個堿基是相似的，則可以根據(jù)這些序列設(shè)計（兼并）引物，以你篩出的菌的基因組為模版進行pcr調(diào)出基因。后面的操作是很模式化的（不同實驗室有區(qū)別），pcr得到目的基因→膠回收→加A→純化→連接T載體→轉(zhuǎn)化JM109→保藏甘油管、提質(zhì)粒、質(zhì)粒測序→轉(zhuǎn)化表達載體→發(fā)酵做酶學(xué)性質(zhì)分析。 （2）如果你不知道基因，則需要將蛋白純化出來，測定蛋白N端、C端蛋白質(zhì)序列，根據(jù)序列設(shè)計兼并引物，按（1）的步驟調(diào)取基因。 應(yīng)該還有其他方法，你可以看看分子生物學(xué)的教材，看別人用什么方法調(diào)基因。 |
4樓2012-08-28 21:25:19
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿河北工業(yè)大學(xué)0817化工278分求調(diào)劑 +10 | jhybd 2026-03-23 | 15/750 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +5 | BrightLL 2026-03-29 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩333求調(diào)劑 +11 | 北道巷 2026-03-24 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué) +11 | 妮妮ninicgb 2026-03-27 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 329求調(diào)劑 +7 | 星野? 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑 +7 | 嗯滴的基本都 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 340求調(diào)劑 +5 | jhx777 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +5 | 1428151015 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +10 | jjjjjjjjjjl 2026-03-27 | 10/500 |
|
|
|
[有機交流]
高溫高壓反應(yīng)求助
 10+4
|
chibby 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿上海理工能源動力（085800）310分求調(diào)劑 +3 | zhangmingc 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 279 分 求調(diào)劑 +4 | 睡個好覺_16 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 348求調(diào)劑 +4 | 小懶蟲不懶了 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 276求調(diào)劑。有半年電池和半年高分子實習(xí)經(jīng)歷 +10 | 材料學(xué)257求調(diào)劑 2026-03-23 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑，一志愿 南京航空航天大學(xué)大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩 +4 | @taotao 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 351求調(diào)劑 +4 | 麥克阿磊 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 一志愿 本科 北科大 化學(xué) 343 +6 | 13831862839 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +6 | 032500 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料專碩 335 分求調(diào)劑 +4 | 拒絕冷暴力 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 上海電力大學(xué)材料防護與新材料重點實驗室招收調(diào)劑研究生（材料、化學(xué)、電化學(xué)，環(huán)境） +4 | 我愛學(xué)電池 2026-03-23 | 4/200 |
|