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huangsp001新蟲 (初入文壇)
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[交流]
蛋白質(zhì)表達(dá) 已有4人參與
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最近做實(shí)驗(yàn)有點(diǎn)困惑。 研究海洋真核藻類的某一功能基因，實(shí)驗(yàn)室采用的是原核表達(dá)系統(tǒng)�；蚴呛铣傻模铣蓵r(shí)針對(duì)表達(dá)系統(tǒng)做了密碼子優(yōu)化。但是表達(dá)起來就是有障礙，誘導(dǎo)表達(dá)溫度高，產(chǎn)生包涵體蛋白；誘導(dǎo)溫度低，可溶性蛋白產(chǎn)量很低。 表達(dá)系統(tǒng)：pET28b載體，Rosetta（DE3）誘導(dǎo)表達(dá)菌株 誘導(dǎo)條件：OD=0.5，IPTG 0.1、0.5mM，28℃、25℃、20℃、18℃、16℃，20-24h 求教各位大神，如何優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件，才能得到大量的、有活性、可溶蛋白？ |
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| 你需要的蛋白是一定要上清么？如果不需要的話，做一下包涵體復(fù)性試試。一般來說，蛋白表達(dá)純化的實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化主要就是密碼子優(yōu)化和誘導(dǎo)條件的優(yōu)化，建議試著更換載體（如pET-32a）和培養(yǎng)基，如果原核實(shí)在做不出來，你可以改換真核表達(dá)系統(tǒng)。 |
2樓2015-04-08 10:26:51
那年書生
木蟲 (初入文壇)
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3樓2015-05-18 11:12:01
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4樓2015-07-07 09:17:54
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5樓2015-08-07 10:29:03
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