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huangsp001新蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
蛋白質(zhì)表達(dá) 已有4人參與
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最近做實(shí)驗(yàn)有點(diǎn)困惑。 研究海洋真核藻類(lèi)的某一功能基因,實(shí)驗(yàn)室采用的是原核表達(dá)系統(tǒng)。基因是合成的,合成時(shí)針對(duì)表達(dá)系統(tǒng)做了密碼子優(yōu)化。但是表達(dá)起來(lái)就是有障礙,誘導(dǎo)表達(dá)溫度高,產(chǎn)生包涵體蛋白;誘導(dǎo)溫度低,可溶性蛋白產(chǎn)量很低。 表達(dá)系統(tǒng):pET28b載體,Rosetta(DE3)誘導(dǎo)表達(dá)菌株 誘導(dǎo)條件:OD=0.5,IPTG 0.1、0.5mM,28℃、25℃、20℃、18℃、16℃,20-24h 求教各位大神,如何優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件,才能得到大量的、有活性、可溶蛋白? |
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
| 你需要的蛋白是一定要上清么?如果不需要的話(huà),做一下包涵體復(fù)性試試。一般來(lái)說(shuō),蛋白表達(dá)純化的實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化主要就是密碼子優(yōu)化和誘導(dǎo)條件的優(yōu)化,建議試著更換載體(如pET-32a)和培養(yǎng)基,如果原核實(shí)在做不出來(lái),你可以改換真核表達(dá)系統(tǒng)。 |

木蟲(chóng) (初入文壇)

銀蟲(chóng) (小有名氣)

禁蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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