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zwf0919木蟲 (正式寫手)
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[求助]
問一些關(guān)于引物和RNA超弱的問題哈~~~ 已有2人參與
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偏材料方向的，為了做應(yīng)用，不得不趕鴨子上架做點(diǎn)生物方面的東西了。我的問題可能很弱 ，希望大家多指點(diǎn)了，金幣不夠都可以加。過(guò)程呢就是用一個(gè)引物檢測(cè)一段RNA序列，引物和RNA都是生物公司合成的，細(xì)節(jié)上好多就不明白了  ：1. 引物和RNA該怎么保存呢 我看有的帖子說(shuō)引物用超純水稀釋了，放-20度，這個(gè)水里面要加抑制引物分解的東西嗎，類似于RNase抑制劑的？還有，要不要用buffer稀釋，文獻(xiàn)里面貌似用的是引物的buffer溶液？ RNA說(shuō)明書給的是用含DEPC-DW的buffer溶解后存于-20度。這DEPC-DW跟買的DEPC水是一樣嗎？還有，含DEPC-DW的buffer，是先把DEPC加到buffer里再滅菌，還是配個(gè)高點(diǎn)濃度的buffer滅完菌以后再用DEPC水稀釋？ 2.引物和和RNA雜化的溫度 我的引物是22個(gè)堿基，我查了一個(gè)公式是Tc=4 °C×(GC)+2×°C(AT)，這樣算出來(lái)62 °C左右，靠譜嗎？ 我看過(guò)一個(gè)文獻(xiàn)用的雙溫度雜交的，target序列=probe序列+reporter序列，probe序列先跟target序列雜交的時(shí)候是42°C，target上剩下的序列再跟reporter序列雜交的時(shí)候是64°C，這個(gè)溫度選擇有沒有什么講究？ 3.操作環(huán)境 這個(gè)實(shí)驗(yàn)大概要怎樣的環(huán)境條件，我們實(shí)驗(yàn)室有超凈工作臺(tái)，有高溫滅菌。 我看文獻(xiàn)上用了一個(gè)rotating hybridization incubator，直譯過(guò)來(lái)就旋轉(zhuǎn)雜交儀，這個(gè)我們沒有，這個(gè)是不是必須的？我可以用其他的方法代替么，比如水浴控制溫度什么的？ 艾瑪問了好多  ，希望能有蟲子不嫌煩，不吝賜教，謝謝！ |
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zwf0919
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