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[求助]
求助！蛋白質(zhì)切掉GST tag后沉了 已有1人參與
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| 我在BL21里表達(dá)GST-RASSF1A ，谷胱甘肽洗脫后，酶切切掉GST，蛋白就沉了（蛋白PI 9.25），是buffer不對(duì)嗎？如何篩選合適的buffer？另外GST-RASSF1A掛在beads上，不用谷胱甘肽洗脫，直接加酶切掉GST，但只elute下少量RASSF1A，大部分還在beads上，如何防止蛋白切掉tag后沉在beads上？如果沉了，怎樣洗下來(lái)？同樣蛋白帶His tag，也是相似問題，250mM咪唑只洗脫了一小半蛋白，大部分還在Ni beads上，EDTA也洗不下來(lái)（死在beads上的蛋白不做希望），如何避免蛋白沉在Ni beads上？ |
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