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Malyhon新蟲(chóng) (小有名氣)
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2.5. Acridine Orange Staining. At the fifth day of culturing, cells grown on different filmswerewashedwith PBS and stained with 0.1mg/mL acridine orange (Sigma-Aldrich) at room temperature in darkness for 30 min. Then, all the samples were washed with PBS to remove the residual dye and observed through an inverted fluorescencemicroscope (Nikon Ti). 2.6. Cell Viability Assay. Cell viability was measured with Cell Counting Kit-8 (CCK-8, Dojindo, Japan) according to the manufacture’s protocol. The amount of the formazan dye generated by the activity of dehydrogenases in cells on highly water-soluble tetrazolium salt is directly proportional to the number of living cells. Cells were cultured on different PHBVfilms in 48-well plates with six repeats. In brief, at 1, 3, and 5 days after cell seeding, 20 μL ofCCK-8 solution was added to each well and incubated in the incubator for 3 h; then, 100 μL of solution per well was transferred to a 96-well plate and read at 450 nm with a microplate reader (Symergy HT, Biotek). Cell viability can be continually tested in the same well without any toxicity to the cells. |
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Malyhon: 金幣+11, ★★★★★最佳答案 2015-04-28 12:31:44
Malyhon: 金幣+11, ★★★★★最佳答案 2015-04-28 12:31:44
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2.5.吖啶橙著色。 在培養(yǎng)的第五天,用PBS洗滌生長(zhǎng)于不同膜上的細(xì)胞并在室溫下于暗處用0.1mg/mL的吖啶橙（西格瑪-奧德里奇產(chǎn)品）對(duì)其著色。 然后,所有樣品用PBS洗滌以除去殘留的染料，并通過(guò)倒置熒光顯微鏡(尼康Ti)觀察。 2.6.細(xì)胞活力檢測(cè)。 細(xì)胞活力是用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒-8 (CCK-8,日本,同仁公司）按照生產(chǎn)商的方案測(cè)量的。 由高水溶性四唑鹽上的細(xì)胞內(nèi)脫氫酶的活性度所產(chǎn)生的甲臜染料的量與活細(xì)胞數(shù)目成正比。 細(xì)胞于48-孔板中不同PHBV膜上培養(yǎng)，重復(fù)六次�？傊�,在細(xì)胞接種后的第1、3和5天, 將20μL的CCK -8溶液加到每一孔中并于細(xì)菌培養(yǎng)器中培養(yǎng)３小時(shí)；然后,將每孔100μL溶液移至一個(gè)96 -孔板上并用酶標(biāo)儀（Symergy HT, 美國(guó)伯騰儀器有限公司）測(cè)出450 nm處的讀數(shù)。細(xì)胞活力檢測(cè)可以于同一個(gè)對(duì)細(xì)胞沒(méi)有任何毒性的孔中反復(fù)地進(jìn)行。 |
2樓2015-04-27 20:22:01
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