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zoemeig金蟲 (小有名氣)
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[求助]
MTT做不出來，麻煩大家?guī)臀曳治鲆幌�，先謝過啦~ 已有1人參與
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首先貼下我的實(shí)驗(yàn)步驟： 1. 細(xì)胞鋪板：人肺纖維化細(xì)胞HLF，第8代細(xì)胞，96孔板中按每孔2000個(gè)細(xì)胞鋪板（100ul），過夜貼壁； 2. 用含0.1% FBS的DMEM培養(yǎng)基饑餓處理24h； 3. 加藥：按附件表格中的濃度加藥（藥物先溶于100ul步驟2中的培養(yǎng)基中再加入到96孔板中），其中第1、2孔不加，孵育30min； 4. PDGF-BB刺激：加藥30min后，加20ng/ml PDGF-BB（1ug/ml, 4ul）刺激細(xì)胞增殖48h，其中第1孔不加； 5. 測(cè)MTT：48h后，加入20ul 5mg/ml MTT（PBS）溶液，孵育4h后，吸走培養(yǎng)基，加入100ul DMSO，振蕩器振蕩10min，檢測(cè)在570nm處的吸光值。 結(jié)果是空白組的培養(yǎng)條件為含0.1% FBS的DMEM，培養(yǎng)3天后MTT檢測(cè)值接近0.9，與加刺激組相近。 預(yù)計(jì)的結(jié)果應(yīng)該是空白組很低，不知道這是為什么？ 總覺得是這株細(xì)胞的問題，似乎長(zhǎng)太快了。 不知道有沒有人做過相關(guān)的實(shí)驗(yàn)，或者養(yǎng)過人肺成纖維細(xì)胞，麻煩幫我看看這株細(xì)胞有沒有什么問題呢？ 謝謝各位啦~ _5054228.JPG _5114242.JPG _5114243.JPG |
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dengxin6366
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4樓2015-05-16 16:07:17
dengxin6366
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| 空白組可能OD值相對(duì)過高，樓主可以嘗試適當(dāng)降低細(xì)胞密度，這類細(xì)胞生長(zhǎng)比較旺盛。 |
2樓2015-05-16 11:27:00
zoemeig
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