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gdh2009095銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
Hela細(xì)胞 96孔板 MTT 已有4人參與
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各位，我養(yǎng)了半年多的hela細(xì)胞，在細(xì)胞培養(yǎng)瓶中細(xì)胞能正常貼壁，就是里面有很多的小黑點(diǎn)，而且還有少量的死細(xì)胞，我一般使用10%FBS+1640進(jìn)行培養(yǎng)，0.25%EDTA-TYpton消化1-2min,然后加培養(yǎng)基終止，離心5min,分裝1:3，然后鋪96孔板中后，貼壁24小時后死亡的細(xì)胞就會很明顯，所以做MTT時，最后的OD值總是上不去，只有對照空只有0.3左右，試了大半年的時間也不可以，麻煩大家?guī)蛶兔�，分析一下看是不是我養(yǎng)細(xì)胞的過程有哪些問題！跪謝了！ 還有就是在養(yǎng)Hela的時候用在1640中加丙酮酸鈉嗎？是不是不加就不可以？ |
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2樓2014-01-09 14:38:16
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
| 有小黑點(diǎn)的細(xì)胞根本不能使用，因為到每孔100ul的環(huán)境，細(xì)胞非藥物致死會很多，根本測不出藥物的活性，建議換細(xì)胞，一般挽救的效果并不好，如果換后數(shù)值仍低，應(yīng)先暫停實(shí)驗，觀察2-3天細(xì)胞狀態(tài)，應(yīng)在細(xì)胞長勢良好且每次換培養(yǎng)基不論顏色如何但很清澈的情況下再進(jìn)行實(shí)驗，根據(jù)細(xì)胞的長勢來確定鋪板的細(xì)胞數(shù)，瘋長時期有時每孔4000就行，狀態(tài)一般時我鋪過5500 |
3樓2014-01-11 11:19:07
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4樓2014-01-11 11:23:09
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