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小小星星銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
細胞培養(yǎng)方面的問題，希望有高手能幫我一下
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我打算養(yǎng)細胞，研究一種促進細胞生長的藥物的不同的濃度對細胞的生長的促進效果。需要加入牛血清嗎，加入牛血清里面就有生長因子，對實驗有影響嗎，還有一點就是加入了牛血清后培養(yǎng)基本身就是細胞的最佳生長環(huán)境了，再加入藥物會不會沒有效果，甚至反而會抑制細胞的生長呢？ 希望高手能為我指導(dǎo)下，非常感謝 |
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小小星星
銅蟲 (初入文壇)
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2樓2013-09-13 14:42:39
hl16010921
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
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wizardfan: 金幣+2, 謝謝參與 2013-09-14 07:03:27
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
wizardfan: 金幣+2, 謝謝參與 2013-09-14 07:03:27
| 1.平時培養(yǎng)時一般5%~10%的小牛血清（細胞不同，差異很大，有些需要胎牛血清，有些血清需要15%到20%），維持細胞增長，傳代。2.傳代貼壁后養(yǎng)至50%~70%（不同細胞可能到80%），換無血清培養(yǎng)基（細胞太脆弱就加1%或2%的小牛血清），給藥，培養(yǎng)24h（時間自己定，不同細胞不同）測MTT。就OK了。需要摸條件，就是空白細胞不死但生長緩慢的血清濃度。 |
3樓2013-09-13 14:49:19
【答案】應(yīng)助回帖
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wizardfan: 金幣+5, 鼓勵新蟲發(fā)帖，尤其是應(yīng)助 2013-09-14 07:03:57
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
wizardfan: 金幣+5, 鼓勵新蟲發(fā)帖，尤其是應(yīng)助 2013-09-14 07:03:57
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我給樓上補充幾點： 【還有一點就是加入了牛血清后培養(yǎng)基本身就是細胞的最佳生長環(huán)境了，再加入藥物會不會沒有效果，甚至反而會抑制細胞的生長呢？】 細胞培養(yǎng)完換無血清培養(yǎng)基，一般細胞狀態(tài)比較好的話不用再加牛血清，不過，即便加入，問題也不大，也是能夠看出藥物對細胞的促進影響的，不會出現(xiàn)抑制作用，倒是有可能會出現(xiàn)OD值偏高。 測藥物促進細胞增殖有好幾種方法，我簡單介紹一下： 1.比色法：也是現(xiàn)在最常用的方法，包括較早使用的MTT、XTT，性價比非常高，MTT也是國內(nèi)唯一認(rèn)可的方法，但近幾年因為實驗要求的提升，MTT越來越不適合現(xiàn)在去發(fā)論文，或者做研究，復(fù)孔差異大，靈敏度低，細胞毒性大等劣勢非常明顯，后來就有了MTS、CCK-8，都是非常好的測細胞增殖的方法，而且使用96孔板酶標(biāo)儀測，效率很高。 2.H3滲入法：同位素法，是現(xiàn)在最準(zhǔn)確的測細胞增殖的方法，沒有之一，直接標(biāo)記DNA，準(zhǔn)確表達傳代結(jié)果，缺點也比較明顯，是強烈的細胞毒性，用完基本細胞全死了，而且同位素對人體也有一定致癌性，所以使用范圍不廣。 3.Glo：是一種新型的熒光法，通過染色ATP從而表現(xiàn)細胞增殖情況，細胞越多，ATP越多，那么熒光強度就越明顯，非常準(zhǔn)確，而且十分迅速，平均10分鐘就能測得結(jié)果，缺點是成本高，一個樣的成本是CCK-8的兩倍之多，而且保存條件嚴(yán)格，必須-20°冷凍保存。 4.細胞儀檢測：儀器直接讀數(shù)細胞數(shù)量，很準(zhǔn)確，缺點是儀器比較貴，耗時。 5.A Blue：也是一種測細胞增殖活力的方法，不過暫時不是很了解，樓主可以百度一下。 希望可以幫到你！ |
4樓2013-09-13 15:57:42
小小星星
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6樓2013-09-13 16:50:58
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7樓2013-10-15 19:39:15
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