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小小星星銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
細(xì)胞培養(yǎng)方面的問題，希望有高手能幫我一下
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我打算養(yǎng)細(xì)胞，研究一種促進(jìn)細(xì)胞生長的藥物的不同的濃度對細(xì)胞的生長的促進(jìn)效果。需要加入牛血清嗎，加入牛血清里面就有生長因子，對實(shí)驗(yàn)有影響嗎，還有一點(diǎn)就是加入了牛血清后培養(yǎng)基本身就是細(xì)胞的最佳生長環(huán)境了，再加入藥物會(huì)不會(huì)沒有效果，甚至反而會(huì)抑制細(xì)胞的生長呢？ 希望高手能為我指導(dǎo)下，非常感謝 |
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小小星星
銅蟲 (初入文壇)
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2樓2013-09-13 14:42:39
hl16010921
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
wizardfan: 金幣+2, 謝謝參與 2013-09-14 07:03:27
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wizardfan: 金幣+2, 謝謝參與 2013-09-14 07:03:27
| 1.平時(shí)培養(yǎng)時(shí)一般5%~10%的小牛血清（細(xì)胞不同，差異很大，有些需要胎牛血清，有些血清需要15%到20%），維持細(xì)胞增長，傳代。2.傳代貼壁后養(yǎng)至50%~70%（不同細(xì)胞可能到80%），換無血清培養(yǎng)基（細(xì)胞太脆弱就加1%或2%的小牛血清），給藥，培養(yǎng)24h（時(shí)間自己定，不同細(xì)胞不同）測MTT。就OK了。需要摸條件，就是空白細(xì)胞不死但生長緩慢的血清濃度。 |
3樓2013-09-13 14:49:19
【答案】應(yīng)助回帖
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wizardfan: 金幣+5, 鼓勵(lì)新蟲發(fā)帖，尤其是應(yīng)助 2013-09-14 07:03:57
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wizardfan: 金幣+5, 鼓勵(lì)新蟲發(fā)帖，尤其是應(yīng)助 2013-09-14 07:03:57
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我給樓上補(bǔ)充幾點(diǎn)： 【還有一點(diǎn)就是加入了牛血清后培養(yǎng)基本身就是細(xì)胞的最佳生長環(huán)境了，再加入藥物會(huì)不會(huì)沒有效果，甚至反而會(huì)抑制細(xì)胞的生長呢？】 細(xì)胞培養(yǎng)完換無血清培養(yǎng)基，一般細(xì)胞狀態(tài)比較好的話不用再加牛血清，不過，即便加入，問題也不大，也是能夠看出藥物對細(xì)胞的促進(jìn)影響的，不會(huì)出現(xiàn)抑制作用，倒是有可能會(huì)出現(xiàn)OD值偏高。 測藥物促進(jìn)細(xì)胞增殖有好幾種方法，我簡單介紹一下： 1.比色法：也是現(xiàn)在最常用的方法，包括較早使用的MTT、XTT，性價(jià)比非常高，MTT也是國內(nèi)唯一認(rèn)可的方法，但近幾年因?yàn)閷?shí)驗(yàn)要求的提升，MTT越來越不適合現(xiàn)在去發(fā)論文，或者做研究，復(fù)孔差異大，靈敏度低，細(xì)胞毒性大等劣勢非常明顯，后來就有了MTS、CCK-8，都是非常好的測細(xì)胞增殖的方法，而且使用96孔板酶標(biāo)儀測，效率很高。 2.H3滲入法：同位素法，是現(xiàn)在最準(zhǔn)確的測細(xì)胞增殖的方法，沒有之一，直接標(biāo)記DNA，準(zhǔn)確表達(dá)傳代結(jié)果，缺點(diǎn)也比較明顯，是強(qiáng)烈的細(xì)胞毒性，用完基本細(xì)胞全死了，而且同位素對人體也有一定致癌性，所以使用范圍不廣。 3.Glo：是一種新型的熒光法，通過染色ATP從而表現(xiàn)細(xì)胞增殖情況，細(xì)胞越多，ATP越多，那么熒光強(qiáng)度就越明顯，非常準(zhǔn)確，而且十分迅速，平均10分鐘就能測得結(jié)果，缺點(diǎn)是成本高，一個(gè)樣的成本是CCK-8的兩倍之多，而且保存條件嚴(yán)格，必須-20°冷凍保存。 4.細(xì)胞儀檢測：儀器直接讀數(shù)細(xì)胞數(shù)量，很準(zhǔn)確，缺點(diǎn)是儀器比較貴，耗時(shí)。 5.A Blue：也是一種測細(xì)胞增殖活力的方法，不過暫時(shí)不是很了解，樓主可以百度一下。 希望可以幫到你！ |
4樓2013-09-13 15:57:42
小小星星
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7樓2013-10-15 19:39:15
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