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小小星星銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
細(xì)胞培養(yǎng)方面的問題,希望有高手能幫我一下
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我打算養(yǎng)細(xì)胞,研究一種促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)的藥物的不同的濃度對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)的促進(jìn)效果。需要加入牛血清嗎,加入牛血清里面就有生長(zhǎng)因子,對(duì)實(shí)驗(yàn)有影響嗎,還有一點(diǎn)就是加入了牛血清后培養(yǎng)基本身就是細(xì)胞的最佳生長(zhǎng)環(huán)境了,再加入藥物會(huì)不會(huì)沒有效果,甚至反而會(huì)抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)呢? 希望高手能為我指導(dǎo)下,非常感謝 |
銅蟲 (初入文壇)
銅蟲 (初入文壇)
木蟲 (正式寫手)
| 1.平時(shí)培養(yǎng)時(shí)一般5%~10%的小牛血清(細(xì)胞不同,差異很大,有些需要胎牛血清,有些血清需要15%到20%),維持細(xì)胞增長(zhǎng),傳代。2.傳代貼壁后養(yǎng)至50%~70%(不同細(xì)胞可能到80%),換無血清培養(yǎng)基(細(xì)胞太脆弱就加1%或2%的小牛血清),給藥,培養(yǎng)24h(時(shí)間自己定,不同細(xì)胞不同)測(cè)MTT。就OK了。需要摸條件,就是空白細(xì)胞不死但生長(zhǎng)緩慢的血清濃度。 |
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我給樓上補(bǔ)充幾點(diǎn): 【還有一點(diǎn)就是加入了牛血清后培養(yǎng)基本身就是細(xì)胞的最佳生長(zhǎng)環(huán)境了,再加入藥物會(huì)不會(huì)沒有效果,甚至反而會(huì)抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)呢?】 細(xì)胞培養(yǎng)完換無血清培養(yǎng)基,一般細(xì)胞狀態(tài)比較好的話不用再加牛血清,不過,即便加入,問題也不大,也是能夠看出藥物對(duì)細(xì)胞的促進(jìn)影響的,不會(huì)出現(xiàn)抑制作用,倒是有可能會(huì)出現(xiàn)OD值偏高。 測(cè)藥物促進(jìn)細(xì)胞增殖有好幾種方法,我簡(jiǎn)單介紹一下: 1.比色法:也是現(xiàn)在最常用的方法,包括較早使用的MTT、XTT,性價(jià)比非常高,MTT也是國(guó)內(nèi)唯一認(rèn)可的方法,但近幾年因?yàn)閷?shí)驗(yàn)要求的提升,MTT越來越不適合現(xiàn)在去發(fā)論文,或者做研究,復(fù)孔差異大,靈敏度低,細(xì)胞毒性大等劣勢(shì)非常明顯,后來就有了MTS、CCK-8,都是非常好的測(cè)細(xì)胞增殖的方法,而且使用96孔板酶標(biāo)儀測(cè),效率很高。 2.H3滲入法:同位素法,是現(xiàn)在最準(zhǔn)確的測(cè)細(xì)胞增殖的方法,沒有之一,直接標(biāo)記DNA,準(zhǔn)確表達(dá)傳代結(jié)果,缺點(diǎn)也比較明顯,是強(qiáng)烈的細(xì)胞毒性,用完基本細(xì)胞全死了,而且同位素對(duì)人體也有一定致癌性,所以使用范圍不廣。 3.Glo:是一種新型的熒光法,通過染色ATP從而表現(xiàn)細(xì)胞增殖情況,細(xì)胞越多,ATP越多,那么熒光強(qiáng)度就越明顯,非常準(zhǔn)確,而且十分迅速,平均10分鐘就能測(cè)得結(jié)果,缺點(diǎn)是成本高,一個(gè)樣的成本是CCK-8的兩倍之多,而且保存條件嚴(yán)格,必須-20°冷凍保存。 4.細(xì)胞儀檢測(cè):儀器直接讀數(shù)細(xì)胞數(shù)量,很準(zhǔn)確,缺點(diǎn)是儀器比較貴,耗時(shí)。 5.A Blue:也是一種測(cè)細(xì)胞增殖活力的方法,不過暫時(shí)不是很了解,樓主可以百度一下。 希望可以幫到你! |
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