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用DNS法測還原糖遇到的問題，請各位幫忙
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本人在實驗室做微生物生長過程中的還原糖曲線，用的是DNS試劑。 問題1-----DNS試劑： 1、加入3.15g 3,5-二硝基水楊酸 + 250ml 水 溶解 2、加入10.5g氫氧化鈉溶解，依次加入91g 酒石酸鉀鈉，2.5g苯酚、2.5g無水亞硫酸鈉 3、定容500ml，放置1星期 配制過程中沒有出現(xiàn)常見的沉淀或者雞蛋花，在試劑里加入一點還原糖，經加熱會變成棕紅色！不知道配制的DNS試劑有沒有錯?! 問題2-----測試方法 1、標準曲線 管號 0 1 2 3 4 5 6 半乳糖醛酸標準液（mL） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 蒸餾水（mL） 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 DNS試劑（mL） 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 將各管搖勻，在沸水浴中加熱5min，取出后立即冷卻至室溫，在540nm波長下，用0號管調零，分別讀取1~6號管的吸光度。以吸光度為縱坐標，半乳糖醛酸毫克數(shù)為橫坐標，繪制標準曲線。 2、樣品中還原糖含量的測定 取發(fā)酵液，8000r/min下離心5min，于試管中準確加入2ml上清液，再加2mLDNS試劑，將試管搖勻，在沸水浴中加熱5min，取出后立即冷卻至室溫，以標準曲線0號試管作為參比，在540nm波長下比色，記錄吸光度。 結果重復了好幾次，測出來的吸光度都是在0.5左右，沒有表現(xiàn)出隨時間而變化的跡象，可以說是分布在一條水平直線上的點，沒有明顯規(guī)律。理論讓應該是一條先增長后略降低的曲線。不知道問題出在哪里？！ |
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