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rmbszla木蟲 (小有名氣)
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[求助]
噬菌體滴度測(cè)定的一些問題 已有1人參與
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現(xiàn)在在做噬菌體實(shí)驗(yàn)，用的是NEB購買的C7C的隨機(jī)多肽庫。但在測(cè)定滴度時(shí)，會(huì)出現(xiàn)10的8次方一層藍(lán)色，10次方稀釋的藍(lán)斑較少，而12,14次方稀釋藍(lán)斑會(huì)比較多的現(xiàn)象，想咨詢一下是什么原因呢？我該怎么解決？ 實(shí)驗(yàn)步驟主要是： 1. 取過夜培養(yǎng)的菌液 50 μL，加入 5 mL LB液體培養(yǎng)基中，37℃振蕩培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期（OD600≈0.5）。 2. 融化頂層瓊脂，分裝 3 mL/管，保溫于45℃水浴備用。 3. 用LB培養(yǎng)基將洗脫（或擴(kuò)增）后的噬菌體進(jìn)行 10 倍系列稀釋。每次稀釋都換槍頭的 4. 將 10 μL 稀釋好的噬菌體加入到 200 μL 對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的宿主菌液中，混勻，室溫放置 5 min。 5. 將上述感染菌加入4 mL 頂層瓊脂中，快速混勻，傾注于LB/IPTG/X-gal 平板上，37℃培養(yǎng)過夜。 |
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rmbszla: 金幣+1, ★有幫助 2015-09-24 13:47:09
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2樓2015-09-22 19:37:34
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