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rmbszla木蟲 (小有名氣)
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噬菌體滴度測定的一些問題 已有1人參與
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現(xiàn)在在做噬菌體實驗,用的是NEB購買的C7C的隨機多肽庫。但在測定滴度時,會出現(xiàn)10的8次方一層藍(lán)色,10次方稀釋的藍(lán)斑較少,而12,14次方稀釋藍(lán)斑會比較多的現(xiàn)象,想咨詢一下是什么原因呢?我該怎么解決? 實驗步驟主要是: 1. 取過夜培養(yǎng)的菌液 50 μL,加入 5 mL LB液體培養(yǎng)基中,37℃振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期(OD600≈0.5)。 2. 融化頂層瓊脂,分裝 3 mL/管,保溫于45℃水浴備用。 3. 用LB培養(yǎng)基將洗脫(或擴(kuò)增)后的噬菌體進(jìn)行 10 倍系列稀釋。每次稀釋都換槍頭的 4. 將 10 μL 稀釋好的噬菌體加入到 200 μL 對數(shù)生長期的宿主菌液中,混勻,室溫放置 5 min。 5. 將上述感染菌加入4 mL 頂層瓊脂中,快速混勻,傾注于LB/IPTG/X-gal 平板上,37℃培養(yǎng)過夜。 |
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