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caichenggu鐵蟲 (小有名氣)
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畢赤酵母GS115表達，用博來霉素篩選對照和轉(zhuǎn)化都長菌落是什么原因？ 已有2人參與
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| 我用畢赤酵母GS115表達蛋白，用化學(xué)轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)化以后，轉(zhuǎn)化和對照都長出了很多菌落，剛開始懷疑是抗生素的問題，現(xiàn)在換了新買的還是老樣子，不知道問題出在哪里，各位大神有沒有遇見過這種問題��？？ |
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ggyy0911
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2樓2015-06-07 13:46:00
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【答案】應(yīng)助回帖
晞朔: MolEPI+1 2015-06-09 11:13:08
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zeocin 100ug/ml對照組我試過很多次是可以不長空載的。索萊寶提供的說明書上寫的很清楚，50ug/ml就可以把酵母菌篩掉了，所以Za說明書上的100ug/ml用來篩單拷貝是夠用了的。 如果對照出現(xiàn)大量菌落。 1.抗生素的問題 如果買的是瓶裝固體zeocin用的時候需要溶解分裝，那配置的抗生素的終濃度夠不夠，向平板里加抗生素是否均勻，如果在倒平板前加抗生素，培養(yǎng)基的溫度是否過高等，而且zeocin對光敏感，配好的zeocin需要避光保存，加好抗生素的平板也盡量避光的，不知道你用的是什么牌子的zeocin 2.涂板涂的過濃或者沒涂開，配合以上問題就可能出現(xiàn)對照長菌，但是如果大量長菌，不排除你宿主菌本身就污染雜菌的可能。 [ 發(fā)自小木蟲客戶端 ] |
7樓2015-06-08 13:50:14
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8樓2015-06-08 16:27:12
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9樓2015-06-08 16:53:33
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