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[交流] 關(guān)于酵母抗zeocin時(shí)間問(wèn)題

GS115本身是沒(méi)有zeocin抗性的。
但是為了確保萬(wàn)無(wú)一失，我將GS115挑單菌落，30°C 搖16h，菌液在OD600為0.3左右，涂200ul于 YPD+zeocin（博來(lái)霉素終濃度為100ug/ml）上，30°C避光培養(yǎng)，但是72個(gè)小時(shí)就長(zhǎng)了很小的菌落。是zeocin失效了，還是什么其他問(wèn)題？還是我在涂板的時(shí)候就應(yīng)該避光操作？

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1樓 2012-04-16 10:25:42

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元雪湞

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lyani(金幣+1): 謝謝參與

遇到和樓主相似的問(wèn)題，我是將大腸桿菌劃線與含zeocin的LB平板的，24小時(shí)不長(zhǎng)，但是，36小時(shí)就長(zhǎng)出來(lái)了很微小的菌落，是zecin長(zhǎng)時(shí)間失效了么？我要挑選的是用于做電轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)用的，在zeoxin上不長(zhǎng)的菌，這可怎么挑啊

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4樓2012-09-08 10:13:33

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墨香若水

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lyani(金幣+1): 謝謝參與

涂板沒(méi)必要避光操作，我以前都是用25-50ug/ml 可能菌體太濃的原因吧也可能Z失效直接挑單菌落畫板看會(huì)不會(huì)長(zhǎng)~

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2樓2012-04-16 10:32:33

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lyani

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2樓: Originally posted by 墨香若水 at 2012-04-16 10:32:33:
涂板沒(méi)必要避光操作，我以前都是用25-50ug/ml 可能菌體太濃的原因吧也可能Z失效直接挑單菌落畫板看會(huì)不會(huì)長(zhǎng)~

謝謝。

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3樓2012-04-16 10:41:33

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啊Q精神

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zeocin不是100%有效的，說(shuō)明書上應(yīng)該有說(shuō)明了有效成分占多少
操作手冊(cè)上是涂多少？
G418的話是涂10的5次方個(gè)細(xì)胞到一塊板，1OD1ml好像是5乘10的7次方個(gè)細(xì)胞

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5樓2012-09-09 17:39:30

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reallpf

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關(guān)于Zeocin抗性的使用，一般大腸是100mL培養(yǎng)基加25uL就足夠，但是要是LLB，不能使用LB，高鹽濃度會(huì)降低Zeocin效率。
對(duì)于酵母，100mL培養(yǎng)基加40-50uL足矣。
而且Zeocin抗性的篩選效率一般比較低，長(zhǎng)得菌落數(shù)會(huì)少，所以要適當(dāng)增加轉(zhuǎn)化用的質(zhì)粒濃度和DNA量，特別是轉(zhuǎn)化酵母。

關(guān)于倒Zeocin抗性平板，倒板后吹板時(shí)機(jī)的避光，培養(yǎng)記得避光。涂板時(shí)是不用避光的。

而Zeocin抗性72h肯定還有篩選效率的，不會(huì)失效。所以可能是你的Zeocin本來(lái)效率就不好，或者GS115污染。

另外倒板加Zeocin抗性的時(shí)候，溫度非常重要，最好的是手心不燙，手背燙（大約45-50度）。溫度高了，抗性會(huì)失效的。

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6樓2012-09-09 19:57:27

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一休陳

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2樓: Originally posted by 墨香若水 at 2012-04-16 10:32:33
涂板沒(méi)必要避光操作，我以前都是用25-50ug/ml 可能菌體太濃的原因吧也可能Z失效直接挑單菌落畫板看會(huì)不會(huì)長(zhǎng)~

請(qǐng)問(wèn)你以前是用博來(lái)霉素篩選釀酒酵母陽(yáng)性克隆嗎？博來(lái)霉素母液保存也是要低溫凍存避光保存對(duì)吧？一般博來(lái)霉素多釀酒酵母陽(yáng)性克隆的篩選工作濃度為25-50ug/ml?

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7樓2014-02-21 11:04:06

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一休陳

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6樓: Originally posted by reallpf at 2012-09-09 19:57:27
關(guān)于Zeocin抗性的使用，一般大腸是100mL培養(yǎng)基加25uL就足夠，但是要是LLB，不能使用LB，高鹽濃度會(huì)降低Zeocin效率。
對(duì)于酵母，100mL培養(yǎng)基加40-50uL足矣。
而且Zeocin抗性的篩選效率一般比較低，長(zhǎng)得菌落數(shù)會(huì)少， ...

請(qǐng)問(wèn)你的博來(lái)霉素的母液濃度是100mg/mL嗎？

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8樓2014-02-21 14:26:47

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張94530

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用了LB培養(yǎng)基，zeocin的效率會(huì)降低多少呢，濃度為100ug/ml，還能篩選嗎?

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9樓2015-08-25 15:24:13

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Mr.四娃

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我的加到500ug，ml，長(zhǎng)出了全部是雜菌，為什么呢

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10樓2016-03-22 11:06:07

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