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guoqin_shiyin銀蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
副溶血弧菌基因敲除蔗糖反向篩選長(zhǎng)出的菌落很怪
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采用自殺載體敲除副溶的基因,第一次重組得到氯霉素抗性的重組子,第二次重組在10%蔗糖平板上長(zhǎng)出來(lái)大個(gè)的像液滴一樣的菌落,擔(dān)心是污染,不涂布直接點(diǎn)接蔗糖平板,得到同樣結(jié)果;該菌落在氯霉素平板不長(zhǎng),擔(dān)心蔗糖濃度不對(duì),做了濃度梯度,從7%一直到16%,每個(gè)平板上都是長(zhǎng)出的這個(gè)樣子的菌落,PCR無(wú)目的片段.這個(gè)菌落點(diǎn)接在科瑪嘉平板,絕大部分都不長(zhǎng),長(zhǎng)出的幾個(gè)居然是藍(lán)色的......真心無(wú)語(yǔ)了....明明第一輪重組得到的結(jié)合子科瑪嘉點(diǎn)上去是紫紅色的,可是經(jīng)過(guò)一輪蔗糖平板,得到古怪菌落,點(diǎn)擊科瑪嘉又變成藍(lán)色... 真心求助各位大神,到底是為什么? 懷疑污染的話,應(yīng)該不太可能了,因?yàn)槭欠磸?fù)劃線純化挑取單斑了......而且對(duì)第一輪得到的結(jié)合子也做了副溶的PCR鑒定,TDH,toxr基因都擴(kuò)增出來(lái)了..... 這個(gè)水滴狀的菌落會(huì)不會(huì)是SacB基因其實(shí)沒(méi)丟,把菌搞死了? |
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2樓2015-06-16 15:05:51
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3樓2015-06-17 15:03:18
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6樓2015-06-19 22:31:53
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9樓2017-07-25 21:08:50
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