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guoqin_shiyin銀蟲 (正式寫手)
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[求助]
副溶血弧菌基因敲除蔗糖反向篩選長出的菌落很怪
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采用自殺載體敲除副溶的基因,第一次重組得到氯霉素抗性的重組子,第二次重組在10%蔗糖平板上長出來大個的像液滴一樣的菌落,擔心是污染,不涂布直接點接蔗糖平板,得到同樣結果;該菌落在氯霉素平板不長,擔心蔗糖濃度不對,做了濃度梯度,從7%一直到16%,每個平板上都是長出的這個樣子的菌落,PCR無目的片段.這個菌落點接在科瑪嘉平板,絕大部分都不長,長出的幾個居然是藍色的......真心無語了....明明第一輪重組得到的結合子科瑪嘉點上去是紫紅色的,可是經(jīng)過一輪蔗糖平板,得到古怪菌落,點擊科瑪嘉又變成藍色... 真心求助各位大神,到底是為什么? 懷疑污染的話,應該不太可能了,因為是反復劃線純化挑取單斑了......而且對第一輪得到的結合子也做了副溶的PCR鑒定,TDH,toxr基因都擴增出來了..... 這個水滴狀的菌落會不會是SacB基因其實沒丟,把菌搞死了? |
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guoqin_shiyin
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guoqin_shiyin
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6樓2015-06-19 22:31:53
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