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111玲瓏鎮(zhèn)新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助GR-DTNB循環(huán)法測定谷胱甘肽庫的一些問題
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| 最近在測植物組織中谷胱甘肽庫的量，采用的是分光光度計測定412nm處的吸光值�；驹硗珿SH測定，在此基礎上加入GR酶將GSSG還原成GSH，循環(huán)反復致使產(chǎn)物TNB增加，吸光值增加。方法中寫GSH和GSSG交替，總量不變。要測定3min時的吸光值，有的測定的是4min時的吸光值，想問為什么是3或4min，這個時間是怎么確定的？我在測定時發(fā)現(xiàn)3min后吸光值還是在增加的，但一定時間后開始下降。已經(jīng)做了谷胱甘肽的標準曲線，是將3min時的吸光值帶入還是將3min內吸光值的變化率帶入求得的是谷胱甘肽庫？求大神幫忙答疑解惑，小生不勝感激！ |
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2樓2015-06-04 21:33:22
1012203014
金蟲 (正式寫手)
- 應助: 9 (幼兒園)
- 金幣: 334.1
- 散金: 31
- 紅花: 3
- 帖子: 395
- 在線: 232.6小時
- 蟲號: 1349300
- 注冊: 2011-07-18
- 性別: GG
- 專業(yè): 化學反應工程
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測定總巰基含量時，15 mg蛋白樣品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 緩沖液（0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0）。測定自由巰基含量時，15 mg樣品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 緩沖液中，而后加入50 μL Ellman 試劑 （DTNB, 即5,5-二硫基雙2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 緩沖液，4 mg/mL），在25℃條件下保溫反應60 min, 離心（5000 g, 15 min），上清液在412 nm 處測定吸光值，以含Ellman 試劑的Tris-Gly 緩沖液為空白對照。 巰基含量的計算公式如下： SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C 式中：A —除去試劑空白后樣品的吸光度值 D—稀釋倍數(shù) C—樣品濃度（mg/mL） 問題1：上述公式中稀釋倍數(shù)D是怎么算的（具體的式子），如果完全按照上述方法是不是就是1？ 問題2：我測的物質為毛發(fā)固體樣品，二硫鍵含量在350μmol/g附近，此種測試方法是否具有可行性 問題3：由于毛發(fā)樣品中含有非水溶性蛋白，又沒喲測量二硫鍵含量的更好的方法 |
3樓2015-10-07 21:17:14
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