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pqq226銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
SDS-PAGE 已有4人參與
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濃縮膠5%,分離膠15%，電泳跑到一半多的位置出現(xiàn)彎曲，條帶不直，跑了好多次都是這種情況，樣品進(jìn)行了離心然后取的上清，加樣量15微升。請各路大神指點一下，感謝感謝 20150602-6.jpg |
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pqq226: 金幣+3, ★有幫助 2015-06-10 09:54:02
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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這個跑的還算可以的，通常膠跑到最后都或多或少都有些彎曲現(xiàn)象，不過，你的第7條帶跑的很好啊，這個加的是什么樣品？ 以下是對蛋白表達(dá)的SDS-PAGE一些建議： 1. 電泳凝膠濃度選擇不當(dāng)。 2. 低于10Kd 的小分子蛋白質(zhì)要用Tricine 膠。 3. 靠近前沿的電泳帶分辨率不佳。根據(jù)分子量與凝膠孔徑的關(guān)系，選擇適當(dāng)濃度的凝膠。 4. 蛋白質(zhì)樣品水解。注意除去蛋白質(zhì)樣品的內(nèi)源性的水解酶，不要反復(fù)凍融。 5. 電泳時間過長或過短。溴酚藍(lán)達(dá)到分離膠的底部即應(yīng)該關(guān)閉電泳電源。 6. 緩沖溶液、SDS 都要新鮮配制。 7. 避免加樣過多，提高分辨率。小體積樣品可給出窄帶，加樣體積根據(jù)樣品濃度和凝膠厚度靈活掌握。一般上樣 體積為10-15uL（即2-10ug 蛋白質(zhì)）。 8. 加熱變性后的蛋白質(zhì)樣品要放置到室溫即電泳，不要久放，因為蛋白質(zhì)的二硫鍵在高溫下可能是會斷開，但是 暴露于空氣中溫度降低會重新形成二硫鍵，而且可能在過久放置過程中蛋白質(zhì)可能會再折疊，更不要扔到冰箱 里保存。 |
3樓2015-06-05 10:37:48
4樓2015-06-05 13:57:55
mataomatao
禁蟲 (正式寫手)
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2樓2015-06-03 20:00:35
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