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lo@丹丹@ve金蟲 (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于葡萄糖檢測(cè)的問(wèn)題 已有1人參與
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各位蟲友，你們?cè)谧銎咸烟菣z測(cè)時(shí)，用的是我們平常用的D型葡萄糖嗎？還是經(jīng)過(guò)什么處理，最近在做葡萄糖的檢測(cè)，但是增大葡萄糖的濃度，但是反應(yīng)溶液還是不變色，求指點(diǎn)。 我是將葡萄糖溶解在磷酸緩沖溶液中，然后加入葡萄糖氧化酶，37℃，保溫1h，然后加入醋酸緩沖溶液、TMB、催化劑，繼續(xù)攪拌，但是溶液就是不變色，這是什么原因呢？ |
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 葡萄糖氧化酶 |
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雨夢(mèng)無(wú)聲
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不好意思，馬大哈沒(méi)看到你說(shuō)了催化劑。我覺(jué)得不需要太在意避光是否，我做的時(shí)候能測(cè)出來(lái)就是普通的白色小離心管水浴鍋水浴能顯色。我覺(jué)得有幾點(diǎn)值得考慮，一，你用來(lái)產(chǎn)生羥基自由基的催化劑是否鐵基？是的話用磷酸緩沖液可能有影響，因?yàn)楦鶕?jù)楊秀榮老師有關(guān)報(bào)道磷酸根會(huì)抑制四氧化三鐵的活性，你的催化是否有類似情況，可以考慮換醋酸緩沖液。二，是否葡萄糖氧化產(chǎn)生雙氧水的時(shí)候體積較大，導(dǎo)致在下一步氧化TMB顯色的時(shí)候加入的酸性緩沖液的pH超出最佳的催化條件，也就是說(shuō)第一步溶液體積過(guò)大，后面再加酸溶液根本就沒(méi)達(dá)到pH 4.0左右的最佳催化條件。三，第二步的顯色催化仍讓需要37°左右水浴。 |
4樓2015-06-08 16:22:30
雨夢(mèng)無(wú)聲
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我的催化劑的確是鐵基的，但是在第一步產(chǎn)生過(guò)氧化氫的實(shí)驗(yàn)中，文獻(xiàn)中提到要在磷酸緩沖溶液中進(jìn)行，但是加的量很少，只有100微升，然后再顯色的時(shí)候是加入的醋酸緩沖溶液3ml。而且文獻(xiàn)中有報(bào)道，如果直接用醋酸緩沖溶液的話會(huì)抑制葡萄糖氧化酶的活性。您說(shuō)的第三點(diǎn)好像是我實(shí)驗(yàn)沒(méi)有做出來(lái)的關(guān)鍵，我是放在室溫中進(jìn)行的，這個(gè)我改進(jìn)一下試試。還有您的葡萄糖氧化酶是用什么配的啊，怎么保存的，另外您可以將您剛說(shuō)的文獻(xiàn)發(fā)我一下嗎？謝謝。 |
5樓2015-06-08 16:33:36
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