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lo@丹丹@ve金蟲 (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于葡萄糖檢測的問題 已有1人參與
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各位蟲友，你們在做葡萄糖檢測時，用的是我們平常用的D型葡萄糖嗎？還是經(jīng)過什么處理，最近在做葡萄糖的檢測，但是增大葡萄糖的濃度，但是反應(yīng)溶液還是不變色，求指點。 我是將葡萄糖溶解在磷酸緩沖溶液中，然后加入葡萄糖氧化酶，37℃，保溫1h，然后加入醋酸緩沖溶液、TMB、催化劑，繼續(xù)攪拌，但是溶液就是不變色，這是什么原因呢？ |
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 葡萄糖氧化酶 |
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雨夢無聲
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2樓2015-06-07 17:42:07
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不好意思，馬大哈沒看到你說了催化劑。我覺得不需要太在意避光是否，我做的時候能測出來就是普通的白色小離心管水浴鍋水浴能顯色。我覺得有幾點值得考慮，一，你用來產(chǎn)生羥基自由基的催化劑是否鐵基？是的話用磷酸緩沖液可能有影響，因為根據(jù)楊秀榮老師有關(guān)報道磷酸根會抑制四氧化三鐵的活性，你的催化是否有類似情況，可以考慮換醋酸緩沖液。二，是否葡萄糖氧化產(chǎn)生雙氧水的時候體積較大，導(dǎo)致在下一步氧化TMB顯色的時候加入的酸性緩沖液的pH超出最佳的催化條件，也就是說第一步溶液體積過大，后面再加酸溶液根本就沒達(dá)到pH 4.0左右的最佳催化條件。三，第二步的顯色催化仍讓需要37°左右水浴。 |
4樓2015-06-08 16:22:30
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