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神經(jīng)嘻嘻鐵蟲 (初入文壇)
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一些做transwell肝癌細(xì)胞（7703)侵襲的問題！求大神指點(diǎn)。
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最近正學(xué)著做Transwell，用的24孔板是Corning的Transwell小室，基質(zhì)膠是BD的Matrigel膠（說明書說是9.8mg/ml的濃度）。我主要做肝癌細(xì)胞的侵襲實(shí)驗(yàn)，小室鋪7703肝癌細(xì)胞，下面24孔板里鋪細(xì)胞A，研究肝癌細(xì)胞在A的影響下細(xì)胞侵潤率。 我上室的細(xì)胞濃度為1*10^5，每孔100微升，用無血清的1640配。下室細(xì)胞也是1*10^5，每孔500微升，用10%FBS+DMEM配。Matrigel膠我不確定用多少稀釋，就試了一下1:3和1:9，每孔100微升，培養(yǎng)24h，用棉簽去除基質(zhì)膠和上層培養(yǎng)基，PBS洗，10%福爾馬林固定20min，PBS洗，0.1%結(jié)晶紫染色20min，DDW洗3次，棉棒擦干。 問題： 我之前看文獻(xiàn)說肝癌細(xì)胞能貼壁在transwell底部，但是染色后顯微鏡下我一個(gè)細(xì)胞都沒有看到？？難道是基質(zhì)膠的稀釋度不對么？？？下層細(xì)胞我倒是看到死了很多，但是A和7703長得一樣，所有我不能確定它是否侵襲下去了。 請大神們幫我看看，到底哪一步驟出了問題�。�！ 小女子跪謝�。。。�！ |
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icypandora
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2樓2015-08-10 09:44:35
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