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神經(jīng)嘻嘻鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
一些做transwell肝癌細(xì)胞(7703)侵襲的問(wèn)題!求大神指點(diǎn)。
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最近正學(xué)著做Transwell,用的24孔板是Corning的Transwell小室,基質(zhì)膠是BD的Matrigel膠(說(shuō)明書(shū)說(shuō)是9.8mg/ml的濃度)。我主要做肝癌細(xì)胞的侵襲實(shí)驗(yàn),小室鋪7703肝癌細(xì)胞,下面24孔板里鋪細(xì)胞A,研究肝癌細(xì)胞在A的影響下細(xì)胞侵潤(rùn)率。 我上室的細(xì)胞濃度為1*10^5,每孔100微升,用無(wú)血清的1640配。下室細(xì)胞也是1*10^5,每孔500微升,用10%FBS+DMEM配。Matrigel膠我不確定用多少稀釋,就試了一下1:3和1:9,每孔100微升,培養(yǎng)24h,用棉簽去除基質(zhì)膠和上層培養(yǎng)基,PBS洗,10%福爾馬林固定20min,PBS洗,0.1%結(jié)晶紫染色20min,DDW洗3次,棉棒擦干。 問(wèn)題: 我之前看文獻(xiàn)說(shuō)肝癌細(xì)胞能貼壁在transwell底部,但是染色后顯微鏡下我一個(gè)細(xì)胞都沒(méi)有看到??難道是基質(zhì)膠的稀釋度不對(duì)么???下層細(xì)胞我倒是看到死了很多,但是A和7703長(zhǎng)得一樣,所有我不能確定它是否侵襲下去了。 請(qǐng)大神們幫我看看,到底哪一步驟出了問(wèn)題!! 小女子跪謝。。。! |
新蟲(chóng) (初入文壇)
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