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yufeiwaner新蟲 (小有名氣)
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[求助]
哺乳動(dòng)物未完全降解RNA/DNA的研究方法
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蟲友們，小弟所在的實(shí)驗(yàn)室采集得到死亡12小時(shí)的海豚組織樣品，提取了幾次總RNA，發(fā)現(xiàn)RNA已經(jīng)降解，28S和18S條帶都看不到。小弟有個(gè)想法是依然反轉(zhuǎn)RNA，然后設(shè)計(jì)PCR產(chǎn)物為100-150bp的引物做基因克隆，不知行不行？另外想請(qǐng)教蟲友們：RNA降解的是從5’和3’開始的么？會(huì)不會(huì)從中間開始斷裂降解？ 另外海豚的DNA降解不嚴(yán)重，想用簡(jiǎn)并引物進(jìn)行PCR，但有同學(xué)說(shuō)這樣做出來(lái)的基因序列不靠譜，小弟是菜鳥一枚，想請(qǐng)教各位前輩，用cDNA和DNA擴(kuò)增出來(lái)的序列有多大不同？主要是因?yàn)閮?nèi)含子的存在么？?jī)?nèi)含子一般在保守區(qū)含量大不大？ 感謝蟲友們的關(guān)注和解答！ 圖1DNA.jpg 圖2RNA.jpg |
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